荷卵巢癌裸鼠E-鈣粘素啟動子去甲基化的研究.pdf

1、目的:
　　 觀察DNA甲基化轉(zhuǎn)移酶(DNA methyltransferase,DNMT)抑制劑5-氮雜-2'-脫氧胞苷(5-Aza-2'-deoxycytidine,5-Aza-CdR)聯(lián)合組蛋白去乙?；?histone deacetylase,HDAC)抑制劑苯丁酸鈉(Sodium 4-Phenylbutyrate,SPB)對荷卵巢癌細胞系SKOV3裸鼠的抗腫瘤增殖作用及其與上皮性鈣黏素(epithelial cadhe

2、rin,E-cad)表達變化的關(guān)系。
　　 方法:
　　 1.用人卵巢漿液性乳頭狀囊腺癌細胞系SKOV3建立卵巢癌裸鼠腹腔移植瘤模型,成瘤后隨機分為4組:對照組、5-Aza-CdR組、SPB組和5-Aza-CdR+SPB組。
　　 2.觀察5-Aza-CdR,SPB以及5-Aza-CdR+SPB對裸鼠腹腔移植瘤的抑制作用及對裸鼠的副作用。
　　 3.免疫組化法檢測腹腔移植瘤中DNMT1、HDAC1以及E-

3、cad的表達變化情況。
　　 4.應(yīng)用甲基化特異性PCR(methylation specific polymerase chain reaction,MSP)檢測各組移植瘤E-cad基因啟動子區(qū)5’CpG島甲基化狀況,以凝膠成像系統(tǒng)對結(jié)果進行分析。
　　 5.RT-PCR法檢測各組移植瘤E-cadmRNA的表達變化情況。
　　 6.Western印跡方法檢測各組移植瘤E-cad蛋白的表達變化情況。
　　

4、 結(jié)果:
　　 1.比較4組裸鼠在治療前后的體重變化,發(fā)現(xiàn)對照組裸鼠體重有所減輕,與治療組相比無統(tǒng)計學(xué)差異(P>0.05)；各組裸鼠體重在治療前后均無統(tǒng)計學(xué)差異(P>0.05)。
　　 2.與對照組相比,治療組中裸鼠腹圍增長量較小,腹水量較少,差異顯著(P<0.05),而與單用藥組相比,聯(lián)合組裸鼠腹圍增長量較小,腹水量較少,差異顯著(P<0.05),兩組單用藥組之間腹水量無統(tǒng)計學(xué)差異(P>0.05)。
　　 3.

5、與對照組相比,治療組裸鼠瘤重明顯減輕,差異顯著(P<0.05),與單用藥組相比,聯(lián)合組瘤重明顯較輕,差異顯著,(P<0.05)；而單用藥組間瘤重?zé)o統(tǒng)計學(xué)差異(P>0.05)。聯(lián)合組比單用藥組裸鼠腹腔移植瘤抑瘤率高,差異顯著(P<0.05)。
　　 4.與對照組相比,各治療組腹腔腫瘤負荷分級要低,差異顯著(P<0.05),而聯(lián)合組與單用藥組相比,聯(lián)合組腹腔腫瘤負荷分級要低,差異顯著(P<0.05),兩單用藥組之間無統(tǒng)計學(xué)差異(P>

6、0.05)。
　　 5.與對照組相比,治療組中肝轉(zhuǎn)移減少,差異顯著(P<0.05),而各給藥組間肝轉(zhuǎn)移無統(tǒng)計學(xué)差異(P>0.05),肺、腎、胰、脾轉(zhuǎn)移情況各組間無統(tǒng)計學(xué)差異(P>0.05)6.在移植瘤組織中,DNMT1和HDAC1呈高表達,5-Aza-CdR能抑制DNMT1的表達,SPB能抑制HDAC1的表達,與對照組相比,差異顯著(P<0.05),聯(lián)合應(yīng)用5-Aza-CdR和SPS對DNMT1和HDAC1的抑制未見協(xié)同作用。<

7、br>　　 7.MSP檢測發(fā)現(xiàn)對照組、SPB組移植瘤中E-cad基因高甲基化,5-Aza-CdR能夠誘導(dǎo)甲基化的E-cad基因去甲基化,聯(lián)合應(yīng)用5-Aza-CdR和SPB可更大程度上誘導(dǎo)甲基化的E-cad基因去甲基化。
　　 8.RT-PCR檢測發(fā)現(xiàn)對照組、SPB組移植瘤中甲基化的E-cad基因表達缺失或者下調(diào),而經(jīng)過5-Aza-CdR治療后,mRNA恢復(fù)表達或者表達增強。聯(lián)合應(yīng)用5-Aza-CdR和SPS可更大程度上恢復(fù)mR

8、NA的表達。
　　 9.免疫組化和Western-blotting檢測發(fā)現(xiàn)對照組、SPB組移植瘤中甲基化的E-cad蛋白表達缺失或者下調(diào),而經(jīng)過5-Aza-CdR治療后,E-cad蛋白恢復(fù)表達或者表達增強。聯(lián)合應(yīng)用5-Aza-CdR和SPB可更大程度上恢復(fù)E-cad蛋白的表達。
　　 結(jié)論:
　　 1.5-Aza-CdR和SPB對荷卵巢癌細胞系SKOV3裸鼠都有抑制增值和誘導(dǎo)凋亡作用,而聯(lián)合用藥組抑制增殖和誘導(dǎo)凋