根除幽門(mén)螺桿菌對(duì)非腫瘤胃黏膜E-鈣黏蛋白、死亡相關(guān)蛋白激酶基因啟動(dòng)子CpG島甲基化的影響.pdf

1、目的：觀察根除幽門(mén)螺桿菌(Hp)對(duì)非腫瘤胃黏膜E-鈣黏蛋白(E-cadherin)、死亡相關(guān)蛋白激酶(DAPK)基因啟動(dòng)子CpG島甲基化的影響,及E-cadherin、DAPK基因啟動(dòng)子CpG島甲基化狀態(tài)和蛋白表達(dá)水平,從而從基因及蛋白兩個(gè)水平上探討胃癌發(fā)病的可能機(jī)制及根除Hp治療在預(yù)防胃癌發(fā)生中的意義。
　　方法：收集因消化不良癥狀就診于安徽醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院門(mén)診行胃鏡及快速尿素酶試驗(yàn)(RUT)檢查為Hp陽(yáng)性的慢性胃炎患者的內(nèi)

2、鏡下胃黏膜組織,留作DNA水平及病理學(xué)組織檢測(cè),記錄患者的臨床及病理資料。Hp陽(yáng)性者給予標(biāo)準(zhǔn)三聯(lián)療法(埃索美拉唑20mg、阿莫西林1.0g、克拉霉素0.5g,均為每天2次,EAC方案)根除Hp,療程10天,停藥4周后行14C尿素呼氣試驗(yàn)(14C-UBT)檢查明確Hp根除情況。Hp成功根除患者隨訪6個(gè)月,再次留取胃黏膜組織。選擇符合RUT和組織嗜銀染色(W-S)法雙陽(yáng)性且Hp成功根除的慢性胃炎患者作為研究對(duì)象,符合RUT和W-S法雙陰性慢

3、性胃炎患者作為對(duì)照。采用甲基化特異性聚合酶鏈反應(yīng)(MSP)法檢測(cè)Hp感染、Hp感染陰性及Hp根除前后E-cadherin、DAPK基因啟動(dòng)子CpG島甲基化狀態(tài),并分析其與臨床病理特征的關(guān)系,將其中的陽(yáng)性結(jié)果克隆并測(cè)序以驗(yàn)證MSP擴(kuò)增的準(zhǔn)確性;采用免疫組化法(IHC)檢測(cè)E-cadherin、DAPK蛋白表達(dá)水平。
　　結(jié)果：1.符合RUT及W-S法雙陽(yáng)性Hp感染的慢性胃炎患者67例,RUT及W-S法雙陰性Hp感染陰性的慢性胃炎患者

4、41例,單一RUT及W-S法陽(yáng)性者共7例視為Hp感染可疑予以剔除。成功根除60例,根除率89.55％(60/67),其中慢性淺表性胃炎(CSG)21例,慢性胃炎伴萎縮(CAG)13例,伴腸化(IM)15例,伴異型增生(DYS)11例。6個(gè)月后隨訪到31例,均成功留取了胃黏膜組織。2.Hp感染患者胃黏膜E-cadherin基因啟動(dòng)子CpG島甲基化陽(yáng)性率明顯高于Hp感染陰性患者(45%對(duì)9.8%,P<0.001),Hp感染患者胃黏膜DAPK

5、基因啟動(dòng)子CpG島甲基化陽(yáng)性率略高于Hp感染陰性患者(50%對(duì)43.9%,P>0.05)。3.E-cadherin基因啟動(dòng)子CpG島甲基化的慢性炎癥評(píng)分明顯高于非甲基化慢性炎癥評(píng)分(2.16對(duì)1.6,P=0.017),DAPK基因啟動(dòng)子CpG島甲基化的慢性炎癥評(píng)分略高于非甲基化慢性炎癥評(píng)分(1.96對(duì)1.61,P=0.093)。4.單因素發(fā)現(xiàn)胃黏膜E-cadherin基因啟動(dòng)子CpG島甲基化與慢性炎癥、Hp相關(guān)(P=0.004,P=0.

6、001),Logistic回歸表明Hp感染是E-cadherin基因啟動(dòng)子CpG島甲基化的唯一影響因素[優(yōu)勢(shì)比(OR值)7.568,95%置信區(qū)間(CI)2.396-23.906,P=0.001],與患者性別、年齡、抽煙、喝酒、胃癌家族史等無(wú)相關(guān)性。5.E-cadherin基因啟動(dòng)子CpG島甲基化水平在Hp根除后明顯低于Hp根除前(12.9%對(duì)45.16%,P=0.017),DAPK基因啟動(dòng)子CpG島甲基化水平在Hp根除后低于Hp根除前

7、(22.6%對(duì)51.6%,P=0.134)。6.免疫組化顯示E-cadherin、DAPK蛋白表達(dá)水平從慢性萎縮性胃炎到腸化到異型增生有逐步下降趨勢(shì)(P>0.05)。在E-cadherin、DAPK基因甲基化檢測(cè)陽(yáng)性的患者中存在E-cadherin、DAPK蛋白表達(dá)下調(diào)。
　　結(jié)論：1.Hp感染的非腫瘤胃黏膜組織E-cadherin基因啟動(dòng)子CpG島甲基化陽(yáng)性率明顯高于Hp感染陰性組織,且Hp感染是E-cadherin基因啟動(dòng)子C