聯(lián)合應(yīng)用骨髓基質(zhì)細(xì)胞（BMSCs）與Bcl-2基因治療大鼠腦缺血后GDNF表達(dá)的研究.pdf

1、最新研究表明，骨髓基質(zhì)細(xì)胞(BMSCs)是骨髓內(nèi)除造血干細(xì)胞之外的非造血干細(xì)胞，可誘導(dǎo)分化為神經(jīng)元和神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞，因此許多動(dòng)物實(shí)驗(yàn)利用骨髓基質(zhì)細(xì)胞移植治療腦梗死而發(fā)現(xiàn)促進(jìn)腦梗死后神經(jīng)功能恢復(fù)。Bcl-2基因具有抗凋亡作用，應(yīng)用bcl-2基因治療大鼠局灶性腦缺血可以抑制神經(jīng)細(xì)胞的凋亡，減少梗死灶體積，改善大鼠神經(jīng)功能。膠質(zhì)細(xì)胞源性神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子GDNF抑制梗死形成、減輕腦水腫、減少細(xì)胞凋亡、減少遲發(fā)性神經(jīng)元損傷。本實(shí)驗(yàn)擬聯(lián)合應(yīng)用具有抗凋亡作

2、用的bcl-2基因和骨髓基質(zhì)細(xì)胞來(lái)治療大鼠局灶性腦缺血，觀察是否對(duì)缺血再灌注腦組織發(fā)揮協(xié)同或疊加保護(hù)作用，同時(shí)檢測(cè)具有神經(jīng)保護(hù)作用的GDNF表達(dá)是否增加，從而希望為腦梗死的治療開(kāi)辟一條新途徑。 實(shí)驗(yàn)材料與方法: 取健康Wistar大鼠，采用Lorlga改良栓線法制成大腦中動(dòng)脈閉塞(MCAO)模型，缺血2小時(shí)后再灌注，共分四組：空白對(duì)照組：10只，BcL-2組：10只，BMSCs組：10只，BMSCs+Bcl-2組：10只

3、；于再灌注3小時(shí)后經(jīng)頸動(dòng)脈注射pLXSN-Bcl-2質(zhì)粒10微克，于再灌注24小時(shí)后經(jīng)尾靜脈注射BMSC3×10<'6>。各組MCAO后3天(n=5)，14天(n=5)，處死，觀察指標(biāo)：應(yīng)用免疫組化技術(shù)檢測(cè)bcl-2蛋白和GDNF及骨髓基質(zhì)細(xì)胞的表達(dá)情況。從前囟前后1毫米取材，常規(guī)固定、石蠟包埋、連續(xù)冠狀切片(厚6微米)，進(jìn)行免疫組化染色，通過(guò)TUNEL法檢測(cè)細(xì)胞凋亡情況。各組數(shù)據(jù)均以x±s表示，組間比較采用SPSS10.0軟件進(jìn)行方差

4、分析及t檢驗(yàn)。 實(shí)驗(yàn)結(jié)果: 1.Bcl-2蛋白表達(dá)：Bcl-2組、Bcl-2+BMSCs組在缺血再灌注3天、14天的bcl-2蛋白表達(dá)較空白組、BMSCs組明顯增加。 2.BMSCs在腦內(nèi)紋狀體區(qū)分布的表達(dá)情況：BMSCs+Bcl-2組與BMSCs組比較，BMSCs數(shù)明顯增多。 3.神經(jīng)細(xì)胞凋亡情況：BMSCs+Bel-2組腦內(nèi)細(xì)胞凋亡在各個(gè)時(shí)間點(diǎn)較BMSCs組、Bcl-2組、空白對(duì)照組明顯減少。

5、 4.GDNF的表達(dá)情況：BMSCs+Bcl-2組GDNF表達(dá)水平在各個(gè)時(shí)間點(diǎn)較BMSCs組、Bcl-2組、空白對(duì)照組明顯增多。 結(jié)論: 1、聯(lián)合應(yīng)用骨髓基質(zhì)細(xì)胞與Bcl-2抗凋亡基因治療大鼠大腦中動(dòng)脈閉塞腦缺血再灌注后Bcl-2蛋白表達(dá)增多、骨髓基質(zhì)細(xì)胞增多、腦內(nèi)細(xì)胞凋亡減少、GDNF增多。 2、Bcl-2基因與骨髓基質(zhì)細(xì)胞協(xié)同作用，促使神經(jīng)細(xì)胞及骨髓基質(zhì)細(xì)胞在腦內(nèi)的凋亡進(jìn)一步減少，從而避免腦缺血再灌注后腦細(xì)胞