骨髓及人臍帶源干細(xì)胞治療大鼠慢性腎損傷的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、慢性腎臟病在臨床較為常見(jiàn)，最終引起慢性腎功能不全，導(dǎo)致機(jī)體多臟器受累，目前尚缺乏有效的治療方法，延緩及修復(fù)慢性腎損傷是一個(gè)亟待解決的問(wèn)題。近年來(lái)干細(xì)胞移植用于腎臟病治療被廣泛研究，越來(lái)越多的證據(jù)肯定了干細(xì)胞在急性腎損傷方面的治療效果，但干細(xì)胞用于慢性腎損傷方面的治療研究較少，是否有明確的治療作用尚不肯定。因此，我們采用大鼠腎臟大部分切除手術(shù)建立大鼠慢性腎損傷模型，應(yīng)用同種異體骨髓單個(gè)核細(xì)胞及人臍帶源間充質(zhì)干細(xì)胞心內(nèi)注射方法進(jìn)行干細(xì)胞移植

2、，研究干細(xì)胞對(duì)大鼠慢性腎損傷的保護(hù)作用及相關(guān)分子機(jī)制。
　　目的：建立大鼠腎臟大部分切除模型，研究骨髓單個(gè)核細(xì)胞及人臍帶源間充質(zhì)干細(xì)胞移植對(duì)慢性腎損傷大鼠尿蛋白排泄、腎功能、腎組織病理學(xué)及腎組織TGF-β1、CTGF及TIMP-1表達(dá)的影響，探討干細(xì)胞對(duì)慢性腎損傷的治療效果及作用機(jī)制。
　　方法：采用改良腎臟5/6切除術(shù)建立大鼠慢性腎損傷模型，造模成功后隨機(jī)分為非治療組（NT組），骨髓單個(gè)核細(xì)胞治療組（MT1組），人臍帶源間

3、充質(zhì)干細(xì)胞治療組（MT2組）以及骨髓單個(gè)核細(xì)胞與人臍帶源間充質(zhì)干細(xì)胞混合治療組（MT3組）,并設(shè)立正常對(duì)照組（C組）。按分組情況分別采用等量生理鹽水、同種異體骨髓單個(gè)核細(xì)胞1x108個(gè)、人臍帶源間充質(zhì)干細(xì)胞1x105個(gè)、同種異體骨髓單個(gè)核細(xì)胞與人臍帶源間充質(zhì)干細(xì)胞混合液（兩者各半量）心內(nèi)注射。治療4周后，檢測(cè)各組大鼠的24小時(shí)尿蛋白定量、血清尿素、肌酐，普通光鏡及電鏡下觀察各組大鼠腎臟病理改變，通過(guò)免疫組化及蛋白印跡方法觀察腎組織TGF

4、-β1、CTGF及TIMP-1的表達(dá)情況。
　　結(jié)果：1.尿蛋白排泄及腎功能：各治療組大鼠的尿蛋白排泄、血清尿素、肌酐均較非治療組大鼠降低，除MT3組大鼠尿素與NT組比較無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差別外，其余各治療組大鼠與NT組比較尿蛋白排泄及腎功能改善均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），但各治療組間無(wú)顯著差別(P＞0.05)。2.腎臟組織病理學(xué)分析：各治療組大鼠腎組織與非治療組比較，系膜增生、系膜外基質(zhì)沉積、腎小球損傷及硬化較輕，腎間質(zhì)炎細(xì)胞浸潤(rùn)、腎

5、間質(zhì)面積及間質(zhì)纖維化改變較輕，腎小球基質(zhì)相對(duì)面積、腎小球硬化指數(shù)明顯降低(P<0.05)，但各治療組間無(wú)明顯差別(P＞0.05)；電鏡結(jié)果提示各治療組大鼠足細(xì)胞損傷相對(duì)非治療組改變輕微。3.免疫組織化學(xué)檢測(cè)：TGF-β1及TIMP-1在正常組大鼠的腎小球上皮細(xì)胞和腎小管上皮細(xì)胞有少量表達(dá)；在非治療組腎小球系膜細(xì)胞、上皮細(xì)胞、系膜區(qū)和腎小管上皮細(xì)胞均有表達(dá)。各治療組與非治療組比較TGF-β1及TIMP-1表達(dá)減弱（P＜0.05），但各治療

6、組間無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。4.蛋白印跡結(jié)果：各治療組腎組織TGF-β1及CTGF表達(dá)較NT組減弱（P＜0.05），各治療組間無(wú)顯著差別(P＞0.05)。
　　結(jié)論：骨髓單個(gè)核細(xì)胞及人臍帶源間充質(zhì)干細(xì)胞可以降低腎大部分切除慢性腎損傷大鼠的尿蛋白排泄，減輕血清尿素及肌酐水平，對(duì)慢性腎損傷大鼠的腎功能具有保護(hù)作用。形態(tài)學(xué)觀察提示，骨髓單個(gè)核細(xì)胞及人臍帶源間充質(zhì)干細(xì)胞可以抑制腎小球肥大，減輕足細(xì)胞損傷，減輕腎小球硬化面積，減輕腎間