豚鼠高脂血癥、早期動(dòng)脈粥樣硬化模型的建立、機(jī)理探討及與大鼠模型的比較研究.pdf

1、目的： 建立豚鼠高脂血癥及早期動(dòng)脈粥樣硬化模型，探討其脂代謝紊亂特征及相關(guān)分子機(jī)制，同時(shí)與大鼠模型進(jìn)行比較，闡明豚鼠作為高脂血癥和早期動(dòng)脈粥樣硬化模型的優(yōu)勢(shì)所在。 方法： (1)豚鼠高脂血癥模型的初步建立與研究：豚鼠模型1和模型2組分別給予0.05％和0.1％膽固醇飼料誘導(dǎo)4周，4周后取血取肝臟，測(cè)定不同誘導(dǎo)條件下血脂和肝脂變化，初步觀察豚鼠高脂血癥模型的形成情況。 (2)豚鼠高脂血癥模型的建立、機(jī)制研究

2、及與大鼠模型的比較：豚鼠模型和大鼠模型1組均給予0.1％膽固醇飼料，大鼠模型2組給予1％膽固醇飼料，連續(xù)4周，于實(shí)驗(yàn)第3、4周分別取血取肝臟，動(dòng)態(tài)觀察血脂變化情況，酶聯(lián)免疫方法檢測(cè)血清CETP及LP(a)濃度，酶法測(cè)定肝臟ACAT以及CYP7AI活性變化，RT-PCR方法檢測(cè)肝臟ACAT和CYP7A1mRNA表達(dá)變化。 (3)豚鼠早期動(dòng)脈粥樣硬化模型的建立、機(jī)制研究及與大鼠模型的比較：以1％膽固醇飼料同時(shí)誘導(dǎo)豚鼠和大鼠，于實(shí)驗(yàn)第

3、6和第8周分兩批處理動(dòng)物(取血、肝臟及主動(dòng)脈)，比色法測(cè)定血清脂質(zhì)水平，HE染色觀察主動(dòng)脈弓部早期動(dòng)脈粥樣硬化病理形態(tài)學(xué)變化，酶聯(lián)免疫方法檢測(cè)血清CETP、LP(a)及Ox—LDL濃度，酶法檢測(cè)肝臟ACAT活性變化，免疫組織化學(xué)方法測(cè)定主動(dòng)脈壁PCNA、CD36以及VCAM—1蛋白表達(dá)變化。 結(jié)果： (1)豚鼠對(duì)飼料中膽固醇極為敏感，在低膽固醇(0.05％)飼料誘導(dǎo)下，豚鼠模型組即可表現(xiàn)出明顯高脂血癥特征，同時(shí)根據(jù)膽固醇

4、攝入量變化出現(xiàn)明顯的劑量—高脂血癥效應(yīng)的依賴關(guān)系。膽固醇劑量由0.05％增加至0.1％時(shí)，與正常組比較，其血清TC分別升高1.96倍和3.18倍；LDL—C分別升高2.15倍和3.47倍。同時(shí)，兩個(gè)模型組肝臟TC和TG水平較正常對(duì)照組顯著升高(P<0.01)。 (2)高脂血癥模型：以低含量膽固醇(0.1％)飼料誘導(dǎo)豚鼠3周，其模型組血清TC、LDL—C和TG分別較正常組升高4.04倍、3.75倍和1.24倍。表明已形成典型的高脂

5、血癥病變，并在誘導(dǎo)第4周進(jìn)一步升高。在相同誘導(dǎo)條件下，大鼠血清TC、LDL—C、TG水平均無(wú)明顯變化。將飼料中膽固醇含量增加10倍(含1％膽固醇飼料)，連續(xù)誘導(dǎo)大鼠3周后，血清TC和LDL—C分別升高1.24倍和1.54倍，第4周血清TC、LDL—C水平進(jìn)一步升高，但升高幅度明顯低于豚鼠低膽固醇(0.1％)模型組(P<0.05)。豚鼠模型組于實(shí)驗(yàn)4周后，血清CETP濃度和肝臟ACAT活性與對(duì)照組比較明顯升高(P<0.05，P<0.01)

6、，肝臟CYP7A1活性無(wú)明顯變化。大鼠模型1和2組肝臟CYP7A1活性及其mRNA表達(dá)均顯著升高(P<0.01)，血清CETP濃度、肝臟ACAT活性及其mRNA表達(dá)均無(wú)明顯變化。 (3)早期動(dòng)脈粥樣硬化模型：以1％膽固醇飼料誘導(dǎo)豚鼠6周，主動(dòng)脈內(nèi)膜—中膜明顯增厚(表現(xiàn)為內(nèi)皮細(xì)胞水腫、平滑肌細(xì)胞水腫及細(xì)胞增殖)、內(nèi)膜單核細(xì)胞、巨噬細(xì)胞等炎性細(xì)胞浸潤(rùn)與聚集顯著增多，形成早期動(dòng)脈粥樣硬化特征性病變，同時(shí)，近50％動(dòng)物動(dòng)脈內(nèi)膜表層進(jìn)一步

7、發(fā)展形成脂紋脂斑病變，鏡下表現(xiàn)為大量泡沫細(xì)胞聚集成堆，周邊可見(jiàn)單核巨噬細(xì)胞，但病灶內(nèi)未找到變性的膠原纖維帽，無(wú)明顯組織細(xì)胞壞死，無(wú)鈣化灶和出血灶，未見(jiàn)明顯血栓形成，為動(dòng)脈粥樣硬化的脂紋脂斑期病變，實(shí)驗(yàn)第6、8周脂斑發(fā)生率分別為4/9和6/15。而相同誘導(dǎo)條件下大鼠動(dòng)脈管壁未形成早期動(dòng)脈粥樣硬化特征病變，且模型組無(wú)一例主動(dòng)脈出現(xiàn)脂紋脂斑。 此外，于實(shí)驗(yàn)第6周和8周豚鼠血清脂質(zhì)水平、CETP、LP(a)及Ox—LDL濃度，肝臟ACA

8、T活性均較正常對(duì)照組明顯升高；主動(dòng)脈壁PCNA、CD36及VCAM—1蛋白表達(dá)均明顯增強(qiáng)。大鼠模型組于實(shí)驗(yàn)第6周和8周血清脂質(zhì)水平明顯升高，但升高幅度顯著低于豚鼠；誘導(dǎo)6周時(shí)血清CETP、LP(a)及Ox—LDL濃度，肝臟ACAT活性均無(wú)明顯改變，誘導(dǎo)8周血清CETP和Ox—LDL升高，但升高幅度不如豚鼠模型組；同時(shí)，其主動(dòng)脈壁PCNA、CD36以及VCAM—1蛋白表達(dá)未發(fā)生明顯改變。 結(jié)論： 豚鼠對(duì)膽固醇飼料的敏感性明

9、顯高于大鼠，給予較低含量膽固醇飼料誘導(dǎo)一定周期，豚鼠可形成典型的高脂血癥，而大鼠在相同誘導(dǎo)條件下血脂升高不明顯，增加膽固醇含量后可形成高脂血癥模型，但血脂升高幅度明顯低于同期豚鼠模型組。增加膽固醇含量和延長(zhǎng)誘導(dǎo)時(shí)間，豚鼠模型組可形成動(dòng)脈粥樣硬化早期病變，而大鼠模型則未出現(xiàn)類似病變。其原因和機(jī)制與高脂血癥、動(dòng)脈粥樣硬化形成過(guò)程中涉及的關(guān)鍵酶、蛋白、細(xì)胞因子和受體(包括CETP、CYP7A1、ACAT、LP(a)、Ox—LDL、PCNA、C