大蒜油對利福平及異煙肼所致肝臟毒性保護作用的實驗研究.pdf

1、研究目的
　　近年來由于結核疫情反彈及耐多藥結核菌和多耐藥結核菌的出現，導致結核防治情況愈加復雜，結核治療療程及用藥等增加，結核藥物導致的肝臟損傷的發(fā)生率也逐年上升，成為藥物性肝損傷最常見的原因之一，特別是異煙肼(INH)、利福平(RIF)所致的肝損傷居前兩位。雖然關于利福平、異煙肼等抗結核藥物誘導產生肝臟毒性的研究很多，但是這些抗結核藥物的損傷機制并沒有得到完全的闡述，目前較多的損傷機制研究集中在氧化抗氧化機制，研究發(fā)現該肝臟毒

2、性的產生可能與體內氧化抗氧化水平失衡有關。
　　大蒜油具有廣泛的藥理作用，于數千年前就開始廣泛應用于食藥領域。比如大蒜油有明顯的殺菌消炎作用，特別是近幾年有不少研究發(fā)現大蒜的油狀提取物對多種結核桿菌，特別是多耐藥性結核桿菌、耐多藥結核桿菌以及一些非抗藥結核桿菌可以起到很明顯的抑制作用。大蒜油含有很多抗氧化活性的有效成分，它能明顯預防由于外源物質如常見藥物如對乙酰氨基酚等誘導產生的急性肝臟損傷，但是大蒜油對利福平和異煙肼所致肝臟損傷

3、是否有保護作用國內外尚未見報道。
　　本次研究參考相關文獻，采用RIF和1NH混合灌胃制備結核藥物肝損傷的動物模型，通過檢測血清中丙氨酸氨基轉移酶(ALT)、天冬氨酸氨基轉移酶(AST)、堿性磷酸酶(ALP)和總膽紅素(TB)等指標以及觀察肝臟組織病理學切片，證實大蒜油是否具有預防RIF和INH引起的藥物肝損傷的作用，并從機體氧化抗氧化系統(tǒng)等方面探討大蒜油預防結核藥物肝損傷的機理，為以后進一步研究及臨床應用提供科學依據。
　

4、　研究方法
　　1.動物模型建立
　　健康雄性Wistar大鼠SPF級，180-200g，適應性喂養(yǎng)7天后，隨機分為5組:大蒜油低、中、高劑量處理組、RIF+INH模型組、正常對照組，每組12只。
　　首先大蒜油處理組同時灌胃給予相應濃度的大蒜油(20、40和80mg/kg)，正常對照組灌胃給予等體積的玉米油，2h后RIF+INH模型組和大蒜油處理組均灌胃給予RIF(150mg/kg)+INH(100mg/kg)，對照

5、組灌胃給予等體積的5％淀粉溶液。連續(xù)灌胃28天后處死大鼠，并將血清及剩余肝臟凍存。
　　2.大蒜油預防結核藥物肝損傷的效果評價
　　計算肝臟系數;測定血清中ALT、AST、ALP及TB的活性或含量;制備肝臟病理切片，蘇木素-伊紅(HE)染色，觀察肝損傷情況。
　　3.大蒜油對機體氧化抗氧化系統(tǒng)的影響
　　測定肝臟勻漿及血清中超氧化物歧化酶(SuperoxideDismutase，SOD)、過氧化氫酶(catala

6、se，CAT)、谷胱甘肽過氧化物酶(glutathioneperoxidase，GSH-Px)、谷胱甘肽還原酶(glutathionereductase，GR)、谷胱甘肽硫轉移酶(glutathioneS-transferase，GST)、丙二醛(malondialdehyde，MDA)、谷胱甘肽(glutathione，GSH)、總抗氧化能力(TotalAntioxidantCapacity，T-AOC)。
　　4.統(tǒng)計學處理<

7、br>　　用IBMSPSSStatistics20統(tǒng)計軟件進行數據分析，采用One-wayANOVA，并進行兩兩比較，P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。
　　研究結果
　　1.血清中ALT、AST、ALP及TB的變化
　　與正常對照組大鼠相比，模型組大鼠血清中ALT、AST及ALP的活性明顯升高(P＜0.05或P＜0.01)，TB的含量明顯升高（P＜0.01）;與模型組大鼠相比，大蒜油低、中、高劑量處理組血清中ALT、A

8、ST、ALP的活性明顯降低(P＜0.05或P＜0.01)，TB的含量降低。
　　2.血清及肝臟組織中MDA的變化
　　與正常對照組大鼠相比，模型組大鼠血清及肝臟組織中MDA水平明顯升高（P＜0.05）;與模型組大鼠相比，大蒜油低、中、高劑量處理組大鼠血清中MDA水平分別降低了2.91％、9.30％(P＞0.05)，20.35％(P＜0.05)，肝臟組織中MDA水平明顯降低（P＜0.05）。
　　3.血清及肝臟組織中GS

9、H的變化
　　與正常對照組大鼠相比，模型組大鼠的血清及肝臟組織勻漿中GSH水平明顯降低（P＜0.05）;與模型組大鼠相比，大蒜油高劑量處理組大鼠血清中GSH水平明顯升高（P＜0.05），肝臟組織中GSH水平也明顯升高了27.56％(P＜0.05)。
　　4.血清及肝臟組織中GST、GSH-Px和GR的變化
　　與正常對照組大鼠相比，模型組大鼠的血清GST水平降低，但差異無統(tǒng)計學意義，模型組大鼠肝臟勻漿中GST水平明顯降

10、低(P＜0.05);與模型組大鼠相比，大蒜油低、中、高劑量處理組大鼠血清中GST水平升高，但差異無統(tǒng)計學意義，大蒜油中、高劑量處理組大鼠肝臟組織中GST水平明顯升高（P＜0.05）。
　　與正常對照組大鼠相比，模型組大鼠血清及肝臟組織勻漿中GSH-Px水平明顯降低;與模型組大鼠相比，大蒜油中、高劑量處理組大鼠血清中GSH-Px水平明顯升高(P＜0.05)，大蒜油低、中、高劑量處理組大鼠肝臟組織中GSH-Px水平明顯升高(P＜0.0

11、5)。
　　與正常對照組大鼠相比，模型組大鼠血清及肝臟組織勻漿中GR水平沒有明顯改變，與模型組大鼠相比，大蒜油低、中、高劑量處理組大鼠血清GR水平有所升高，但差異無統(tǒng)計學意義。大蒜油低、中、高劑量處理組大鼠肝臟勻漿組織中GR水平分別升高10.81％、18.92％、29.73％(P＜0.05)。
　　5.血清及肝臟組織中SOD和CAT的變化
　　與正常對照組大鼠相比，模型組大鼠血清及肝臟組織勻漿中SOD水平明顯降低，與模

12、型組大鼠相比，大蒜油低、中、高劑量處理組大鼠血清SOD水平明顯升高（P＜0.05），并且大蒜油低、中、高劑量處理組大鼠肝臟組織勻漿中SOD水平也明顯升高（P＜0.05）。
　　與正常對照組大鼠相比，模型組大鼠血清及肝臟勻漿組織中CAT水平明顯降低(P＜0.05)，大蒜油低、中、高劑量處理組大鼠血清中CAT水平分別降低23.96％、19.26％、10.75％，但差異無統(tǒng)計學意義，大蒜油低、中、高劑量處理組大鼠肝臟勻漿中CAT水平明顯

13、下降（P＜0.05）;與模型組大鼠相比，大蒜油低、中、高劑量處理組大鼠血清中CAT水平分別升高4.13％、10.59％、22.22％，但差異無統(tǒng)計學意義，大蒜油低、中、高劑量組大鼠肝臟組織中CAT水平明顯升高（P＜0.05）。
　　6.血清及肝臟組織T-AOC的變化
　　與正常對照組大鼠相比，模型組、大蒜油低劑量處理組大鼠血清及肝臟勻漿中T-AOC水平明顯降低（P＜0.05）;與模型組大鼠相比，大蒜油低、中、高劑量處理組大鼠

14、血清T-AOC水平有所升高，但差異無統(tǒng)計學意義，大蒜油低、中、高劑量處理組大鼠肝臟勻漿中T-AOC水平分別升高1.52％(P＞0.05)、15.15％（P＜0.05）、22.22％(P＜0.05)。
　　7.肝臟形態(tài)學的變化
　　肝臟石蠟切片HE染色結果顯示模型組肝臟發(fā)生輕微損傷，表現在肝細胞濁腫，中央靜脈周圍部分肝臟細胞出現氣球樣變。大蒜油各處理組病理損傷明顯改善，與正常對照組差異無統(tǒng)計學意義。
　　結論: