反義Cubilin RNA對(duì)阿霉素腎病大鼠腎小管間質(zhì)損傷干預(yù)作用的研究.pdf

1、第三軍醫(yī)大學(xué)碩士學(xué)位論文反義Cubilin RNA對(duì)阿霉素腎病大鼠腎小管間質(zhì)損傷干預(yù)作用的研究姓名：劉俊申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：碩士專(zhuān)業(yè)：內(nèi)科學(xué)（腎內(nèi)）指導(dǎo)教師：何婭妮20071101第三軍醫(yī)大學(xué)碩士學(xué)位論文鹽水。2 、各組隨機(jī)選取5 只大鼠，于實(shí)驗(yàn)第O 、7 、1 4 、2 l 、2 8 天收集2 4 h 尿液，測(cè)定2 4 h 尿蛋白水平。各組隨機(jī)選取5 只大鼠，于實(shí)驗(yàn)第7 、1 4 、2 8 天斷頭處死，從心臟采血收集血清，測(cè)定血清總蛋白、白

2、蛋白、尿素氮和肌酐；同時(shí)留取左腎，取部分‘腎組織作冰凍切片，另取腎組織置l O ％福爾馬林中固定備用。3 、激光共聚焦顯微鏡下觀察綠色熒光蛋白表達(dá)情況，判斷腺病毒轉(zhuǎn)染效果。常規(guī)方法行p A S 染色；腎小籬上皮細(xì)胞c u b i l i n 表達(dá)，M C P ．1 表達(dá)采用免疫組化S p 法檢測(cè)，J G l 2 表達(dá)以及腎組織E D 。l 表達(dá)采用免疫組化二步法檢測(cè)，腎小管上皮細(xì)胞白蛋白沉積采用免疫組化直接染色法檢測(cè)。腎小管間質(zhì)損傷評(píng)分

3、、微血管密度( M v D ) 和E D ．1陽(yáng)性細(xì)胞計(jì)數(shù)按參考文獻(xiàn)報(bào)道的方法計(jì)算。二、結(jié)果l 、正、反義c u b i l i n 轉(zhuǎn)染腎小管上皮細(xì)胞的鑒定腺病毒轉(zhuǎn)染第3 天激光共聚焦顯微鏡下觀察到空載體組、p A 嬈a s y 。C U B 組和p A d E a s y 。A c u B 組腎小管有較強(qiáng)的綠色熒光蛋白表達(dá)，而對(duì)照組和模型組僅見(jiàn)微弱的自發(fā)熒光，表明阿霉素腎病大鼠腎組織腺病毒成功轉(zhuǎn)染。2 、反義c u b i l i

4、n 對(duì)阿霉素大鼠尿蛋白、腎功能和病理改變的干預(yù)作用與對(duì)照組比較，模型組、空載體組、p A 嬈a s y —C U B 組和p A d 囂氌s y —A C U 8 組2 4 h尿蛋白水平隨時(shí)間變化顯著升高( P < O ．0 1 ) ，同時(shí)血清C r 、血清B U N 也進(jìn)行性增高( P < O ．0 1 ) 。與模型組比較，p A d 囂a s y —A C u B 組尿蛋自水平雖顯著升高( P 妁。0 1 ) ，但血清c

5、 r 、血清B u N 顯著降低( P < 0 ．0 5 ) 。光鏡下，模型組、空載體組、p A d E a s y ．c u B組可見(jiàn)部分小管擴(kuò)張及空泡樣變一陡，局部區(qū)域可見(jiàn)尿蛋白形成的透明管型，閥質(zhì)水腫、擴(kuò)大，炎細(xì)胞彌散或灶性浸潤(rùn)；而p A d E a s y ．A c u B 組上述病理改變明顯減輕。3 、反義e u b i l i n 對(duì)腎組織c u b i l i n 表達(dá)和白蛋白吞飲的抑制作用與對(duì)照組比較，模型組、空載

6、體組和p A d E a s y 。C u B 組腎小管上皮細(xì)胞c u b i l i n 表達(dá)明顯上調(diào)( P < O ．0 1 ) ，胞漿內(nèi)吞欽自蛋白顯著增加( P < O 。0 1 ) 。相關(guān)性分析顯示，腎小管上皮細(xì)胞白蛋白沉積與c u b i l i n 表達(dá)呈顯著正相關(guān)( Y = O ．7 8 0 ，P 《O ．0 1 ) 。與模型組比較，p A d E a s y ．A C U B 組腎小管上皮細(xì)胞c u b i