人臍帶華爾通氏膠源間充質(zhì)干細胞向男性生殖細胞誘導(dǎo)分化的研究.pdf

1、【背景與目的】生殖細胞缺陷所致的男性不育癥是目前臨床難于攻克的疾病，傳統(tǒng)輔助生殖技術(shù)尚無法從根本上解決此類病人的生育問題，精原干細胞移植是突破這一瓶頸的理想途徑。人臍帶間充質(zhì)干細胞具有多向分化潛能，一定條件下可向三個胚層組織細胞分化，前期的研究表明，人臍帶間充質(zhì)干細胞在體外誘導(dǎo)后表達部分生殖細胞標記，移植到不育小鼠體內(nèi)不發(fā)生排斥反應(yīng)，且可發(fā)生遷移并能存活至少120天。本研究將在前期研究的基礎(chǔ)上，進一步探討人臍帶間充質(zhì)干細胞在體內(nèi)外向精原

2、細胞的分化潛能及其生物學(xué)特性。
　　 【材料與方法】采用差異貼壁法分離、培養(yǎng)、擴增出人臍帶間充質(zhì)干細胞，流式細胞術(shù)檢測干細胞相關(guān)標記表達情況；利用新生小鼠睪丸細胞培養(yǎng)液、維甲酸、睪酮作為條件誘導(dǎo)液，將人臍帶間充質(zhì)干細胞在條件誘導(dǎo)液中培養(yǎng)，顯微鏡觀察誘導(dǎo)前后細胞的形態(tài)學(xué)變化；
　　 RT-PCR、細胞免疫熒光檢測男性生殖細胞相關(guān)標記的表達；將人臍帶間充質(zhì)干細胞移植于不育小鼠睪丸內(nèi)，RT-PCR檢測體內(nèi)移植細胞的生殖細胞相關(guān)

3、標記的表達。
　　 【結(jié)果】人臍帶間充質(zhì)干細胞具有多能干細胞的生物學(xué)特性，高表達多能干細胞標記CD44、CD29、CD59、OCT4；人臍帶間充質(zhì)干細胞在生殖細胞條件誘導(dǎo)液中誘導(dǎo)培養(yǎng)，誘導(dǎo)第7天形態(tài)上開始變細變長，形成類似“蝌蚪樣”細胞，第3、7天表達生殖細胞標記Oct4、Ckit、CD49f、Stella，第14天表達生殖細胞特異標記Vasa；人臍帶間充質(zhì)干細胞移植至不育小鼠睪丸體內(nèi)，1個月后表達生殖細胞標記Stella、Da