糖尿病復合營養(yǎng)酸奶降糖效應的實驗研究.pdf

1、目的：糖尿病(DM)是一種全球范圍內(nèi)嚴重影響人類健康的常見內(nèi)分泌代謝性疾病，其發(fā)病率和死亡率近年來呈逐步上升趨勢。目前全世界已有糖尿病人近1.5億，我國實際患病人數(shù)已達4000萬人以上。DM主要是由于胰島B細胞減少或B細胞功能減退引起的糖、脂肪、蛋白質(zhì)、水及電解質(zhì)代謝紊亂，并可由此產(chǎn)生各種并發(fā)癥，如由大血管或微血管病變所引起的冠心病、腦血管疾病、視網(wǎng)膜病變、腎血管病變等，其中糖尿病患者有50％以上死于冠心病。因此，有效的改善糖尿病的代謝

2、紊亂對預防糖尿病并發(fā)癥、促進疾病康復和提高病人生活質(zhì)量都具有十分重要的意義，而努力探索和積極尋找治療和控制糖尿病的理想方法是醫(yī)學界關注的重要課題。本研究以生物發(fā)酵作為切入點，通過觀察我們所研制的糖尿病復合營養(yǎng)酸奶對保護糖尿病大鼠的胰腺功能、改善糖代謝、降低血糖血脂及對胰腺組織形態(tài)學、脂質(zhì)過氧化狀態(tài)和胰島B細胞凋亡的影響，為糖尿病患者功效食品的研制提供實驗依據(jù)。 方法： 清潔級成年Wister大鼠(雌雄各半)120只，體重

3、190±10克，隨機分為正常對照組、糖尿病對照組、治療組、預防治療組四組，每組30只。在常規(guī)飼料自由進食基礎上，正常對照組給予生理鹽水灌喂，糖尿病對照組和治療組給予普通酸奶灌喂，預防治療組給予糖尿病復合營養(yǎng)酸奶灌喂，隔日一次，每次2毫升，喂養(yǎng)至第15天按四氧嘧啶(ALX)50mg/k.w尾靜脈注射制作糖尿病模型，正常對照組注射生理鹽水。5天后測其空腹4小時后血糖，將血糖值>13.8mmol/L的大鼠做為糖尿病模型大鼠。糖尿病模型制作成功

4、后除治療組動物灌喂液由原來普通酸奶改為糖尿病復合營養(yǎng)酸奶外，其他組動物喂養(yǎng)方式不變，繼續(xù)分組喂養(yǎng)，并于注射ALx后第30天、第90天再次進行空腹4小時血糖測定，注射ALX后第6天、第32天、第92天進行糖耐量測定，注射ALX后第33天、第93天分別從各組大鼠中隨機取10只大鼠進行腹主動脈取血、處死大鼠取材進行以下指標測定：血清中的胰島素(INS)、C-肽(C-P)、丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、肌酐(Cr)、尿素氮(BUN

5、)、甘油三酯(TG)、總膽固醇(TC)和低密度脂蛋白(LDL)的含量，血漿中胰高血糖素(GLU)和糖化血紅蛋白(GHb)含量，光鏡下觀察病理結構改變，TUNEL法測定胰島B細胞凋亡，免疫組化法觀察INS和GLU分泌的表達。 結果： 1.大鼠空腹血糖、糖耐量及糖化血紅蛋白測定結果： 1.1 FBS水平(mmol/L)： 1.1.1注射ALX后第5天，糖尿病對照組、治療組、預防治療組FBS非常顯著高于正常對照

6、組(P<0.01)，預防治療組非常顯著低于糖尿病對照組和治療組(P<0.01)。 1.1.2注射ALX后第30天和90天，糖尿病對照組、治療組、預防治療組非常顯著高于正常對照組(P<0.01)，但治療組、預防治療組非常顯著低于糖尿病對照組(P<0.01)。 1.2糖耐量測定結果(mmol/L)：注射ALx后第6天、第32天、第92天糖尿病對照組、治療組、預防治療組動物0.5h、1.0h、1.5h、2.0h血糖測定值顯著或

7、非常顯著高于正常對照組(P<0.05或p<0.01)，但治療組、預防治療組第32天、92天上述各時相點血糖測定值非常顯著低于糖尿病對照組(P<0.01)，并且預防治療組第6天上述各時相點血糖測定值非常顯著低于治療組(P<0.01)。 1.3糖化血紅蛋白測定結果(％)：注射ALX后第93天，糖尿病對照組、治療組、預防治療組糖化血紅蛋白含量非常顯著高于正常對照組(P<0.01)，但治療組和預防治療組顯著低于糖尿病對照組(P<0.01

8、)。 2.大鼠血清INS、C-P、GLU測定結果： 2.1血清INS含量(μIU/ml)：注射ALX后第33天、第93天，糖尿病對照組、治療組、預防治療組INS含量非常顯著低于正常對照組(P<0.01)，但治療組、預防治療組顯著或非常顯著高于糖尿病對照組(P<0.05或p<0.01)。 2.2血清C-P含量(ng/ml)：注射ALX后第33天和93天，正常組、治療組、預防治療組C-P含量顯著或非常顯著高于糖尿病對

9、照組(P<0.01、P<0.05和P<0.01)，而治療組、預防治療組與正常對照組沒有顯著差異。 2.3血漿GLU含量(pg/ml)：注射ALX后第93天，糖尿病對照組、治療組血漿GLU顯著或非常顯著高于正常對照組(P<0.01、P<0.05)，預防治療組與正常對照組之間無顯著差異(p>0.05)，但預防治療組顯著低于糖尿病對照組(P<0.05)。 3.大鼠血清SOD、MDA含量測定結果： 注射ALX后第33天和

10、93天，糖尿病對照組、治療組、預防治療組SOD含量非常顯著低于正常對照組(P<0.01)，MDA含量非常顯著高于正常對照組(P<0.01)，但治療組、預防治療組SOD含量非常顯著高于糖尿病對照組(p<0.01)，MDA含量顯著或非常顯著低于糖尿病對照組(P<0.05或p<0.01)。 4.大鼠血清TG、TC、LDL測定結果：注射ALLOX后第93天，治療組、預防治療組血清TG、TC、LDL含量顯著或非常顯著低于糖尿病對照組(P<

11、0.05或P<0.01)。 5.大鼠血清Cr和BuN測定結果：注射ALLOX后第93天，糖尿病對照組、治療組、預防治療組Cr和BUN含量非常顯著高于正常對照組(P<0.01)，但治療組、預防治療組顯著或非常顯著低于糖尿病對照組(p<0.05或p<0.01)。 6.大鼠胰島病理結構變化：光鏡下觀察，正常對照組大鼠胰島呈著色淡淺的細胞團，邊界清楚，形態(tài)規(guī)則，胰島內(nèi)細胞排列整齊，胰島數(shù)及島內(nèi)細胞數(shù)較多，大小一致分布均勻，細胞核

12、呈紫藍色，大而圓，核清晰，核仁明顯，胞漿豐富呈淡粉色；糖尿病對照組大鼠胰島細胞結構紊亂，胰島數(shù)及島內(nèi)細胞數(shù)減少，細胞形態(tài)不規(guī)則，多數(shù)胞核變形，固縮，大小不等，出現(xiàn)空泡變性；治療組胰島數(shù)及島內(nèi)細胞數(shù)較糖尿病對照組為多，形態(tài)較為規(guī)則，少部分核固縮；預防治療組大鼠胰島細胞形態(tài)接近正常組，邊界較清楚，細胞排列較整齊，胰島數(shù)及島內(nèi)細胞數(shù)多于治療組，細胞分布均勻，核大小基本相等，無核固縮。 7.大鼠胰島組織細胞胞漿胰島素(INS)和胰高血糖

13、素(GLU)免疫組化結果： 胞漿鏡下觀察，正常對照組胰島B細胞分泌INS最多，遍布胰島中央，分泌顆粒豐富，胞漿著色深黃；糖尿病對照組胰島B細胞分泌Ins顆粒最少，胞漿著色較淺；治療組胰島B細胞分泌INS顆粒數(shù)量較糖尿病對照組微多，胞漿著色淺黃；預防治療組B細胞分泌INS顆粒數(shù)量接近正常對照組，胞漿著色較深。正常對照組胰島A細胞分泌GLU顆粒數(shù)量少均勻分布胰島周圍，著色較淺；糖尿病對照組胰島A細胞分泌GLU顆粒豐富，大部分已經(jīng)進入

14、到胰島中間區(qū)，胞漿著色深黃；治療組A細胞分泌GLU顆粒數(shù)量較糖尿病對照組少，一部分進入到胰島中間區(qū)，胞漿著色淡黃；預防治療組A細胞分泌GLU顆粒大部分分布在胰島周圍，分泌顆粒較多，胞漿著色淺黃。 8.大鼠胰腺組織胰島B細胞凋亡：正常對照組可見少數(shù)凋亡細胞；糖尿病對照組有較多凋亡細胞；治療組和預防治療組也可見一些凋亡細胞，但明顯少于糖尿病對照組；預防治療組B細胞凋亡數(shù)也較治療組少。 結論： 1.大鼠空腹血糖、糖耐量

15、、糖化血紅蛋白測定結果表明，該糖尿病復合營養(yǎng)酸奶具有明顯改善糖代謝和降血糖效應； 2.胰島病理結構觀察、胰島組織細胞胞漿免疫組化和胰島B細胞凋亡實驗結果表明，糖尿病復合營養(yǎng)酸奶對ALX所致糖尿病大鼠胰島結構和功能的損傷具有保護作用； 3．血清MDA和sOD含量的測定表明，糖尿病復合營養(yǎng)酸奶能明顯減輕糖尿病大鼠機體過氧化損傷，此作用可能是糖尿病復合營養(yǎng)酸奶對胰島結構和功能具有保護作用的機制之一； 4．血清TG、Tc

16、、LDL測定結果表明，糖尿病復合營養(yǎng)酸奶具有改善糖尿病大鼠脂代謝紊亂，此作用對防治糖尿病血清疾病并發(fā)癥是有益的作用； 5．研究結果還表明，該糖尿病復合營養(yǎng)酸奶具有減輕ALX所致糖尿病大鼠腎臟損傷、預防感染和降低死亡率的作用； 6．由于預防治療組動物在注射ALX建立糖尿病模型前即以攝入糖尿病復合營養(yǎng)酸奶，動物實驗的各項研究指標顯示預防治療組較治療組具有更明顯的效果，表明該糖尿病復合營養(yǎng)酸奶對預防糖尿病具有潛在的應用前景；