anti-CD20-scFv-IgGFc -CD28-ζ及anti-CD20-scFv -IgG Fc轉(zhuǎn)染人T淋巴細胞對Daudi細胞殺傷作用的比較.pdf

1、濕州嚼訾院碩士研究生畢業(yè)(學位)論文論文題目：anti—CD20一scFv—IgGFc—CD28一e及anti—CD20scFvIgGFc轉(zhuǎn)染人T淋巴細胞對Daudi細胞殺傷作用的比較綜述題目：Rituximab在血液疾病中的治療進展研究生姓名：譚映霞學科專業(yè)：臨床檢驗診斷學學制：在職申請入學時間：2001年9月指導(dǎo)教師：俞康教授單大銘教授吳建波副教授二OO五年五月詁占州醫(yī)學院砸：學位恐殳一IgGFcCD28一∈和anti—CD20sc

2、Fv—IgGFc重組子的克隆滴度分別為5X103(CFU／m1)，TX103(CFU／m])。兩種質(zhì)粒轉(zhuǎn)染的NIH3T3細胞表面的IgO表達量分別2278％D2536％3分離后的外周血單個核細胞，經(jīng)OKT3、IL一2、PEA—L刺激后的T淋巴細胞比例為951％，病毒上清感染后，經(jīng)G418篩選一周后，H口為我們實驗所得的基因修飾的特異的T淋巴細胞。其中基因修飾的T細胞IgG的表達量均大于20％。4用基因修飾的特異的T淋巴細胞與相同數(shù)量的D

3、audi細胞培養(yǎng)厲，用流式細胞儀榆測Daudi細胞AnnexinV的表達，發(fā)現(xiàn)在24小時內(nèi)有與對照K562細胞明顯增高，PO05，而兩種質(zhì)粒介導(dǎo)的T細胞引起Daudi細胞AnnexinV的表達沒有顯著差異。i用ELISA檢測24、48、72小時時IL2、IFNv的含量，af]ti—CD20一scFv—IgOFc基因修飾的T細胞與Daudi細胞共同培養(yǎng)后，與對照紐相比，IL一2、IFNY無明顯增加，P005。6與anti—CD20scFv

4、—IgGFc基因修飾的T細胞相比較，anti—CD20一scFvIgGFcCD28一‘基因修飾的T細胞殺傷Daudi細胞后，IL一2和IFNv的表達有顯著增高，PO。05。結(jié)論：1經(jīng)OKT3、n2、PHA—1刺激后的PBMc能充分激活，能選擇性的T細胞生長。逆轉(zhuǎn)錄病毒轉(zhuǎn)染激活T淋巴細胞具有很高轉(zhuǎn)染效率，用流式細胞儀檢測發(fā)現(xiàn)基因修飾的T細胞表達重組蛋白可達20％以上。這與轉(zhuǎn)染的PA317細胞能產(chǎn)出高滴度的病毒有關(guān)。2含anti—CD20一

5、scFvIggFc—CD28‘和anti—CD20一scFv—IgOFc重組子基因修飾的T細胞在引起Daudi細胞早期凋亡無顯著性差異，說明CD28一∈基因修飾可能不影響Daudi細胞的早期凋亡。_兩種基因修飾的T細胞在殺傷Daudi細胞的過程中，能產(chǎn)生【L一2、[FNY。anti—CD20一scFv—IggFc—CD28一‘基因修飾的T細胞殺傷Baudi細胞后，II。一2、IFNY增幅更加明顯，說明CD3‘可以刺激T細胞產(chǎn)生大量的細胞