重組蛋白hCD80-anti-CD19 scFv的表達(dá)優(yōu)化及體內(nèi)外功能研究.pdf

1、B細(xì)胞腫瘤通常由于協(xié)同刺激分子低表達(dá)或者表達(dá)缺失導(dǎo)致T細(xì)胞無(wú)能和腫瘤免疫耐受。研究表明，用基因轉(zhuǎn)染的方法使腫瘤細(xì)胞表達(dá)協(xié)同刺激分子可有效增強(qiáng)抗腫瘤免疫。然而，由于技術(shù)尚不成熟、費(fèi)時(shí)費(fèi)力且無(wú)法保證安全性，基因轉(zhuǎn)染的方法在臨床應(yīng)用中受到諸多限制?？贵w介導(dǎo)協(xié)同刺激分子直接靶向結(jié)合于腫瘤細(xì)胞表面是一個(gè)可行性較高的替代方案。為此，我們將人CD80協(xié)同刺激分子的胞外區(qū)基因，與抗CD19單克隆抗體可變區(qū)基因重組，以表達(dá)hCD80/anti-CD19

2、scFv融合蛋白。該融合蛋白通過(guò)pET22b(+)表達(dá)載體在Rosetta(DE3)菌株中得以成功表達(dá)，并能特異性結(jié)合B細(xì)胞腫瘤表面CD19抗原。在體外實(shí)驗(yàn)中，該重組蛋白結(jié)合pre-B細(xì)胞系NALM-6細(xì)胞后，可誘導(dǎo)HLA-A2匹配的淋巴細(xì)胞增殖，分泌細(xì)胞因子并產(chǎn)生較顯著的特異性細(xì)胞毒作用。用NALM-6細(xì)胞在嚴(yán)重免疫缺陷裸鼠(NOD/SCID)所建立的pre-B全身播散性白血病動(dòng)物模型中，hCD80/anti-CD19 scFv重組蛋