骨髓源神經(jīng)樣細(xì)胞移植對(duì)兔SCSG受損修復(fù)作用的研究.pdf

1、目的
　　1、人工體外分離培養(yǎng)兔骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞（Bone marrow mesenchymal stem cells BMSCs）并誘導(dǎo)其分化為骨髓源神經(jīng)樣細(xì)胞。
　　2、兔頸上交感神經(jīng)節(jié)（superior cervical sympathetic ganglion SCSG）損毀模型的建立。
　　3、將骨髓源神經(jīng)樣細(xì)胞植入到SCSG損傷模型體內(nèi)，觀察模型兔瞳孔的變化，并通過測(cè)定損傷局部及海馬組織中腦源性神經(jīng)因子（b

2、rain-derived neurotrophic factor， BDNF）、睫狀神經(jīng)生長因子（Ciliary Neurotrophic Factor，CNTF）的表達(dá)情況，探討骨髓源神經(jīng)樣細(xì)胞移植對(duì)兔頸上交感神經(jīng)節(jié)受損修復(fù)作用及可能的作用機(jī)制。
　　方法
　　利用持針鉗壓榨兔SCSG，制備單側(cè)（右側(cè)）SCSG損傷模型。將體外經(jīng)密度離心聯(lián)合貼壁方法分離培養(yǎng)得到BMSCs，用堿性成纖維細(xì)胞生長因子（Basic Fibrobl

3、ast Growth Facto，bFGF）預(yù)誘導(dǎo)，再經(jīng)CNTF誘導(dǎo)分化為骨髓源神經(jīng)樣細(xì)胞。隨機(jī)地將模型兔分為三組，每組15只。A組為對(duì)照組，B組培養(yǎng)液組，C組為細(xì)胞移植組。模型制作成功第7天時(shí)，A組無處理，B組經(jīng)耳緣靜脈注入細(xì)胞培養(yǎng)液1ml，C組注入含骨髓源神經(jīng)樣細(xì)胞1×106個(gè)的細(xì)胞培養(yǎng)液1ml。移植后1天、7天、10天、14天、21天觀察兔瞳孔變化，移植后第21天處死兔，分離神經(jīng)節(jié)，進(jìn)行HE染色，并采用免疫組化分別檢測(cè)兔SCSG之

4、BDNF和CNTF的表達(dá)水平。取兔海馬區(qū)標(biāo)本進(jìn)行HE染色并檢測(cè)BDNF的表達(dá)水平。
　　結(jié)果
　　1、兔瞳孔直徑(mm)的比較：頸上交感神經(jīng)節(jié)損傷后1、7、10、14、21天時(shí)，A組兔瞳孔直徑分別為：5.81±0.42，5.84±0.34，5.68±0.29，5.91±0.31，5.80±0.36；B組兔瞳孔直徑分別為：5.84±0.32，5.74±0.32，5.63±0.37，5.83±0.27，5.58±0.23；C組兔

5、瞳孔直徑分別為：5.64±0.33，5.71±0.35，6.78±0.33，7.97±0.28，8.05±0.21。C組在10天、14天時(shí)間點(diǎn)，瞳孔直徑均明顯大于A組（P<0.05）。A組、B組不同時(shí)間點(diǎn)比較無明顯差異（P>0.05）。C組不同時(shí)間點(diǎn)比較，差異明顯（P<0.05），14天、21天瞳孔直徑明顯大于1天、7天、10天（P<0.05），14天與21天比較，瞳孔直徑差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。
　　2、BDNF免疫組

6、化染色：A組、B組、C組兔海馬區(qū)BDNF陽性細(xì)胞數(shù)分別為：17.13±2.19，18.53±1.35，20.20±4.29，C組比A組、B組BDNF陽性細(xì)胞數(shù)明顯要多，差異有顯著性（（P<0.05）），A組與B組比較無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。三組兔損傷側(cè)SCSG之BDNF陽性細(xì)胞數(shù)分別為：6.67±1.11，6.80±1.26，12.18±7.93，C組比A組、B組BDNF陽性細(xì)胞數(shù)明顯要多，差異有顯著性（（P<0.05））， A組

7、與B組比較無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。
　　3、CNTF免疫組化染色：A組、B組、C組CNTF陽性細(xì)胞數(shù)分別為：15.6±1.83，15.6±1.54，37.73±7.26，C組明顯高于A組、B組（P<0.05），而A組與B組比較無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。
　　結(jié)論
　　1、骨髓源神經(jīng)樣細(xì)胞移植治療兔SCSG損傷，可促進(jìn)其受損神經(jīng)功能的修復(fù)。
　　2、骨髓源神經(jīng)樣細(xì)胞移植修復(fù)兔SCSG損傷的機(jī)制可能與上調(diào)B