骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞移植對嘌呤霉素氨核苷腎病大鼠足細(xì)胞修復(fù)作用的研究.pdf

1、目的:探討骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(bone mescnchymal stem cells,BMSCs)移植對嘌呤霉素氨基核苷(puromycin aminonucleoside,PAN)腎病大鼠足細(xì)胞足突的修復(fù)作用及其對裂孔隔膜分子Nephrin表達(dá)的影響,為BMSCs移植治療腎病綜合征(nephrotic syndrome,NS)提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　 方法:全骨髓貼壁篩選法體外分離、培養(yǎng)、擴(kuò)增大鼠BMSCs,流式細(xì)胞儀鑒定BMSCs

2、表面抗原,5-溴脫氧尿嘧啶核苷(5-bromodcoxyuridine,Brdu)對細(xì)胞進(jìn)行標(biāo)記;6周齡健康雄性SD大鼠45只隨機(jī)分為3組,每組15只。模型組:一次性腹腔注射嘌呤霉素氨基核苷(puromycin aminonucleoside,PAN)造模,按15mg/100g注射,于造模即日通過腹主動(dòng)脈近腎動(dòng)脈處注射1ml生理鹽水治療;BMSCs組:PAN(15mg/100g)造模,于造模即日通過腹主動(dòng)脈近腎動(dòng)脈處注射1ml BMSC

3、s治療(細(xì)胞移植前經(jīng)Brdu標(biāo)記示蹤),劑量為每只大鼠約1×106/ml;對照組:不予以造模。實(shí)驗(yàn)第10d殺鼠,留取24h尿檢測尿蛋白水平;血標(biāo)本檢測血清白蛋白(Alb)、總膽固醇(TC)、尿素氮(BUN)、血肌酐(Scr)等生化指標(biāo);電鏡下觀察腎組織足細(xì)胞足突改變;免疫組化法檢測Brdu標(biāo)記的細(xì)胞在腎組織中的表達(dá);半定量RT-PCR及Western-blot法檢測Nephrin mRNA及蛋白的表達(dá)變化。
　　 結(jié)果:

4、　　 ①原代分離培養(yǎng)的BMSCs特異性好,流式細(xì)胞儀鑒定CD90表達(dá)陽性、CD45表達(dá)陰性。
　　 ②實(shí)驗(yàn)第10d,模型組大鼠出現(xiàn)大量蛋白尿、血白蛋白降低、膽固醇升高。與模型組比較,BMSCs組尿蛋白、血膽固醇降低,血白蛋白回升,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。各組間血尿素氮、肌酐值無明顯變化,差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。
　　 ③電鏡下,對照組足細(xì)胞足突結(jié)構(gòu)清晰、無融合現(xiàn)象,模型組足細(xì)胞足突廣泛融合、變平,而

5、BMSCs組足突部分融合。
　　 ④免疫組化結(jié)果顯示經(jīng)Brdu標(biāo)記的BMSCs在腎小球及腎小管聚集。
　　 ⑤半定量RT-PCR結(jié)果表明,模型組Ncphrin mRNA相對表達(dá)量較對照組明顯下降,BMSCs組與模型組比較有所增加,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。
　　 ⑥Wester-blot結(jié)果表明,模型組Nephrin蛋白的相對表達(dá)量較對照組明顯下降,BMSCs組與模型組比較有所增加,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜