S1P受體在HA調(diào)控淋巴管屏障功能及淋巴管新生中的機制研究.pdf

1、目的：探討高/低分子量透明質(zhì)酸（High/Low molecular weight hyaluronan，HMW-HA/LMW-HA）對淋巴管屏障功能及淋巴管新生的影響及機制研究；研究鞘氨醇-1-磷酸鹽（Sphingosine-1-phosphate，S1P）受體在不同分子量HA調(diào)控淋巴管屏障功能及淋巴管新生中的作用。
　　方法：1、采用熒光素鈉滲透實驗與免疫熒光實驗分別檢測HMW-HA、LMW-HA對單層淋巴內(nèi)皮細胞（lymph

2、atic endothelial cell，LEC）滲透性和細胞間緊密連接的影響。2、利用MTT、Transwell、Matrigel管腔形成實驗等研究HMW-HA、LMW-HA對淋巴管新生的作用。3、通過免疫熒光及免疫共沉淀觀察S1P受體，淋巴管內(nèi)皮細胞透明質(zhì)酸受體（Lymphatic vessel endothelial hyaluronan rceptor，LYVE-1）分布及相互結(jié)合。4、運用siRNA沉默S1P受體，分別探討其

3、在HMW-HA、LMW-HA誘導(dǎo)淋巴管屏障功能改變及淋巴管新生中的作用。
　　結(jié)果：1、LMW-HA增強單層LEC滲透性，破壞細胞間緊密連接，促進應(yīng)力纖維形成；相反，HMW-HA保護LEC細胞間連接的完整性。2、LMW-HA通過活化下游Src/ERK1/2信號通路促LEC增殖、遷移、管腔形成，而同等濃度下HMW-HA對淋巴管新生無影響。3、LMW-HA/HMW-HA分別增加S1P3受體、S1P1受體蛋白表達水平，siRNA下調(diào)S1

4、P1受體可阻斷HMW-HA對LEC細胞間連接的保護，同時下調(diào)S1P3受體可抑制LMW-HA破壞細胞間連接完整性。4、LYVE-1與S1P3受體是一對“拍檔”，LMW-HA促進S1P3受體與LYVE-1相互結(jié)合，利用siRNA分別下調(diào)S1P3或LYVE-1受體表達后，LMW-HA介導(dǎo)的淋巴管新生受到顯著抑制。
　　結(jié)論：LMW-HA能夠結(jié)合其受體LYVE-1并通過S1P3受體破壞淋巴管屏障，從而促進淋巴管新生；HMW-HA結(jié)合LYV