卵巢癌相關(guān)新基因NM23-H1B的克隆和功能研究.pdf

1、該課題在復(fù)旦大學(xué)遺傳學(xué)研究所遺傳工程國家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室和聯(lián)合基因科技集團(tuán)有限公司以獨(dú)創(chuàng)的"高效循環(huán)差減雜交全長cDNA克隆技術(shù)"取得的具有完整的編碼蛋白信息的、在各種公開數(shù)據(jù)庫中未曾發(fā)表過的、代表成熟mRNA序列的cDNA克隆及其序列為基礎(chǔ),構(gòu)建了人類胎腦cDNA文庫并進(jìn)行了大規(guī)模的測序,作者將其中的全長人類新基因序列輸入數(shù)據(jù)庫,并通過基因表達(dá)譜芯片數(shù)據(jù)篩選出在腫瘤組織中表達(dá)差異的基因.該課題通過設(shè)計(jì)特異性的新基因NM23-H1B引物進(jìn)行R

2、T-PCR實(shí)驗(yàn),用正常組織Clontech的Panel試劑盒驗(yàn)證了新基因NM23-H1B的存在.發(fā)現(xiàn)新基因NM23-H1B在正常成人的十五種組織中都有表達(dá):在腦組織、胎盤組織、肺組織、肝臟、骨骼肌、卵巢組織、外周血細(xì)胞、腎臟、胰腺組織和胸腺組織中表達(dá)量相對較高;而NM23-H1B在心臟、脾臟、前列腺組織、睪丸組織和小腸組織中的表達(dá)量較低.腫瘤(如肝癌、胃癌、胰腺癌等)芯片表達(dá)譜分析,發(fā)現(xiàn)新基因NM23-H1B與多種腫瘤存在相關(guān)性.該課題

3、應(yīng)用RT-PCR、Northern雜交和原位雜交等實(shí)驗(yàn)方法研究新基因與卵巢癌相關(guān)的功能.通過RT-PCR方法,在正常卵巢組織和卵巢腫瘤(包括交界性卵巢腫瘤和卵巢癌)中證實(shí)了存在NM23-H1B基因mRNA的表達(dá),并且在卵巢腫瘤中的表達(dá)明顯高于正常卵巢組織.進(jìn)一步用Northern雜交實(shí)驗(yàn)對上述組織中mRNA的表達(dá)進(jìn)行分析,發(fā)現(xiàn)與正常卵巢組織和交界性卵巢腫瘤相比,卵巢癌組織中NM23-H1 B明顯高表達(dá),而且在早期卵巢癌中的表達(dá)明顯高于晚

4、期卵巢癌,并且高分化卵巢癌中的表達(dá)量較高.原位雜交實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)NM23-H1B廣泛分布于卵巢癌組織中,mRNA表達(dá)產(chǎn)物主要位于細(xì)胞漿內(nèi),部分位于胞膜上,個(gè)別位于細(xì)胞核上;正常卵巢組織中表達(dá)均為陰性或極低表達(dá),卵巢交界性腫瘤(LMP)中表達(dá)陽性率比正常卵巢組織略高,但均為極弱陽性.與Northern雜交的結(jié)果相似.該課題提示NM23-H1 B基因與卵巢癌有明確的相關(guān)性,可能對卵巢癌的發(fā)展有抑制作用,這種作用可能發(fā)生在腫瘤的早期,可能是通過促進(jìn)