大眼長蝽卵黃原蛋白基因克隆、表達(dá)及應(yīng)用研究.pdf

1、大眼長蝽Geocoris pallidipennis是一種重要的捕食性天敵昆蟲，是棉花、煙草等作物害蟲的主要天敵，在害蟲生物防治的應(yīng)用中具有廣闊前景。近年來，對大眼長蝽的研究主要集中在形態(tài)特征，生活習(xí)性等生態(tài)學(xué)和捕食功能上，對其繁殖關(guān)鍵因子——卵黃原蛋白的研究未見報(bào)道。本文克隆了大眼長蝽卵黃原蛋白基因，研究了大眼長蝽卵黃原蛋白基因的分子特征，同時(shí)本研究表達(dá)了37KDa蛋白，明確了37KDa蛋白對大眼長蝽生長繁殖的影響，為人工飼料的改進(jìn)和

2、天敵昆蟲的大規(guī)模繁殖提供了理論基礎(chǔ)和相關(guān)技術(shù)。
　　本論文研究結(jié)果如下:
　　1.利用RT-PCR和RACE技術(shù)克隆得到了大眼長蝽卵黃原蛋白(Vg)基因全序列。該基因cDNA全長5667bp（GenBank登錄號:KP688587），編碼1848個(gè)氨基酸殘基，N-末端的前19個(gè)氨基酸為信號肽。序列分析顯示該卵黃原蛋白序列具有昆蟲卵黃原蛋白所特有的保守基序和RXXR酶切位點(diǎn)。編碼的氨基酸序列比對顯示與半翅目昆蟲Vg氨基酸序列相

3、似度較高，表明克隆的cDNA序列是大眼長蝽的Vg基因序列。
　　2.ELISA檢測發(fā)現(xiàn)隨著發(fā)育時(shí)間的延長，卵黃原蛋白表達(dá)量逐漸增加，羽化后22天達(dá)到高峰，隨后開始下降。本研究利用已克隆的大眼長蝽卵黃原蛋白基因序列，設(shè)計(jì)特異引物擴(kuò)增目的基因片段，成功構(gòu)建了Vg基因片段重組表達(dá)載體，并進(jìn)一步轉(zhuǎn)化寄主細(xì)胞，在不同條件下誘導(dǎo)Vg基因目的片段在大腸桿菌菌株中穩(wěn)定表達(dá)，通過Ni-NTA柱分離純化出目的蛋白。
　　3.研究了Vg基因編碼的