艾片與合成冰片腦保護(hù)及其對血腦屏障影響機(jī)制的研究.pdf

1、目的:比較艾片與合成冰片的腦保護(hù)及其對血腦屏障影響機(jī)制，為闡釋冰片“辛開入腦”，“開竅醒神”的科學(xué)內(nèi)涵，并為臨床合理用藥提供參考。
　　方法：本研究從整體-細(xì)胞-分子水平探討并比較艾片與合成冰片腦保護(hù)及其對血腦屏障影響的機(jī)制。①采用小鼠斷頭、腹腔注射亞硝酸鈉、尾靜脈注射氯化鎂、雙側(cè)頸總動脈伴迷走神經(jīng)結(jié)扎腦缺血模型，觀察艾片與合成冰片對腦缺血缺氧小鼠的存活時間的影響。②線栓法制備局灶性MCAO大鼠模型，測定各組給藥前后大鼠肛溫，測定

2、缺血側(cè)腦水腫率。③采用GC法測定灌胃給予艾片和合成冰片后小鼠腦組織中龍腦透過率。④采用比色法測定MCAO大鼠血清與缺血側(cè)腦組織中超氧化物歧化酶(SOD)活性、丙二醛(MDA)含量，血清與缺血側(cè)腦組織中NO含量、tNOs及iNOs活性，缺血側(cè)中Ca2+含量、T-ATPase、Na+-K+-ATPase、Ca2+-Mg2+-ATPase活性。⑤采用real-time PCR法測定MCAO大鼠模型缺血側(cè)腦水腫中 MDR1mRNA的表達(dá)量；we

3、stern-blot法測定缺血側(cè)腦水腫 P-GP灰度值/β-actin灰度值。⑥采用透射電鏡觀察MCAO大鼠缺血側(cè)半球額頂區(qū)皮質(zhì)血腦屏障的超微結(jié)構(gòu)。⑦利用PC12細(xì)胞（大鼠腎上腺髓質(zhì)嗜鉻瘤細(xì)胞株），用MTT法測定缺血缺氧細(xì)胞的生長；分光光度法測定直接加藥缺血缺氧細(xì)胞Ca2+含量。
　　結(jié)果:
　?。?）艾片與合成冰片抗腦缺血缺氧：①艾片200、133.33、66.67mg/kg劑量組及合成冰片200mg/kg劑量組顯著增加小

4、鼠張口次數(shù)（P＜0.01，P＜0.05）；艾片和合成冰片200mg/kg劑量組均能顯著延長斷頭、腹腔注射亞硝酸鈉、尾靜脈注射氯化鎂、雙側(cè)勁總動脈結(jié)扎小鼠的存活時間（P＜0.01，P＜0.05）。②艾片200mg/kg組能顯著抑制腦缺血再灌注4h的模型大鼠體溫(P<0.05)；艾片200、133.33mg/kg和合成冰片200mg/kg均能顯著抑制再灌注22h的模型大鼠體溫（P＜0.01，P＜0.05）；艾片和合成冰片200、133.33

5、mg/kg組均能顯著降低模型大鼠腦水腫率（P＜0.01，P＜0.05）。
　?。?）艾片與合成冰片對血腦屏障的影響機(jī)制：①艾片灌胃5min的龍腦透過率即可達(dá)0.174％，15min達(dá)高峰，為0.225%；合成冰片灌胃5 min的龍腦透過率為0.113%，20min達(dá)高峰，為0.190%。②艾片與合成冰片200mg/kg組均能顯著降低大鼠缺血側(cè)腦組織及血清MDA含量（P＜0.01，P＜0.05）；極顯著增強腦組織及血清SOD活力（P

6、＜0.01）。③艾片與合成冰片200mg/kg組均能顯著降低大鼠缺血側(cè)腦組織及血清NO含量、tNOs及iNOs活性（P＜0.01，P＜0.05）。④艾片與合成冰片200mg/kg組均能顯著降低大鼠缺血側(cè)腦組織 Ca2+含量、T-ATPase、Na+-K+-ATPase、Ca2+-Mg2+-ATPase活性（P＜0.01，P＜0.05）。⑤艾片和合成冰片200mg/kg組均能顯著降低模型大鼠缺血側(cè)腦組織 P-GP蛋白表達(dá)及 MDR1mRN

7、A表達(dá)量（P＜0.01）。⑥與假手術(shù)組比較，模型組血腦屏障結(jié)構(gòu)受到破壞，線粒體腫脹，粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)擴(kuò)張；而艾片組及合成冰片200mg/kg組能不同程度改善血腦屏障超微結(jié)構(gòu)。⑦艾片與合成冰片的1.6、0.8、0.4μg/100μL均能極顯著增加PC12細(xì)胞OD值（P＜0.01）；極顯著地降低細(xì)胞內(nèi)的Ca2+含量（P＜0.01），且艾片Ca2+含量顯著低于同劑量合成冰片（P＜0.01）。
　　結(jié)論:
　?。?）藥效：艾片與人工合成冰

8、片均有顯著改善生理和病理狀態(tài)下的腦缺血缺氧而發(fā)揮腦保護(hù)作用，可能是發(fā)揮“開竅醒神”的主要藥效學(xué)基礎(chǔ)。
　　（2）機(jī)制：①調(diào)節(jié)血腦屏障：可能與艾片和人工合成冰片所含龍腦迅速透過血腦屏障，分布于腦組織中，改善血腦屏障緊密連接的破壞程度有關(guān)；②抗自由基損傷：均能提高腦內(nèi)及血清SOD活性，并降低MDA含量；③NO通路：能降低腦內(nèi)及血清NO水平，降低tNOs、iNOs活性；④鈣通路：均能降低細(xì)胞內(nèi)鈣水平，降低影響鈣水平的T-ATPase、N

9、a+-K+-ATPase、Ca2+-Mg2+-ATPase活性；⑤P-GP通路：降低MDR1 mRNA表達(dá)量，降低P-GP水平。其通過多環(huán)節(jié)、多路徑發(fā)揮腦保護(hù)作用。
　　綜合分析提示：艾片及合成冰片腦保護(hù)的關(guān)鍵機(jī)制與調(diào)節(jié)P-GP通路、脂質(zhì)過氧化反應(yīng)及NO通路最為密切；其次能調(diào)節(jié)鈣通路，這可能是冰片表達(dá)“辛-浮-心”藥性與入腦“開竅醒神”的主要生物學(xué)機(jī)制。
　?。?）艾片與合成冰片比較優(yōu)勢：依據(jù)強度積分規(guī)則的統(tǒng)計結(jié)果，艾片的腦