芳香開竅藥冰片及石菖蒲對腦得生主要活性成分透過血腦屏障影響的研究.pdf

1、一、目的：
　　 建立大鼠血漿及腦組織中羥基紅花黃色素A(HSYA)、葛根素(Puer)、川芎嗪(TMP)及人參皂苷Rg1(Rg1)的測定方法。考察配伍芳香開竅藥冰片或石菖蒲提取液對腦得生主要活性成分在大鼠體內(nèi)的吸收以及透過血腦屏障(BBB)的影響。為芳香開竅藥引經(jīng)入腦提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　 二、方法：
　　 1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物及給藥方法
　　 1.1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分組選用清潔級健康成年雄性大鼠198只(220-260g

2、),按體重隨機(jī)分3組:腦得生組(Ⅰ)、腦得生配伍冰片組(Ⅱ)、腦得生配伍石菖蒲組(Ⅲ),每組6×11只。
　　 1.2給藥劑量及制備方法按照《中國藥典》2005版,冰片劑量取中等劑量日劑量28 mg·kg-1、石菖蒲日劑量3.0 g·kg-1。腦得生日劑量含HSYA20 mg·kg-1、Puer20 mg·kg-1、TMP10 mg·kg-1、Rg120
　　 mg·kg-1。石菖蒲提取液的制備:石菖蒲加蒸餾水浸泡30

3、min,加熱蒸餾,收集揮發(fā)油水混合溶液,加入適量吐溫80(終含量1％),蒸餾水定容使得到3.0g生藥/mL,的石菖蒲溶液。各組均配置成0.8％羧甲基纖維素鈉(CMC-Na)混懸液。
　　 1.3樣品采集大鼠適應(yīng)性喂養(yǎng)一周后,試驗(yàn)前一天禁食12 h。灌胃給藥后,分別于10,20,30,45 min,1,1.5,2,3,6,8,12 h摘除眼球采血,肝素抗凝,于-70℃冰箱保存。試驗(yàn)完成后在冰臺上快速取大鼠腦組織,剝離軟腦膜,生理鹽

4、水洗凈,濾紙吸干表面水分,稱重,裝入凍存管中,于-70℃冰箱保存。
　　 2生物樣品的測定方法
　　 2.1采用UPLC-MS/MS測定血漿及腦組織勻漿中腦得生主要活性成分Puer、TMP、Rg1的濃度。
　　 2.2采用HPLC測定血漿及腦組織勻漿中腦得生活性成分HSYA的濃度。
　　 3數(shù)據(jù)處理以SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件分析處理,各組大鼠腦血比(AUCbrain/AUCblood)用單因素方差分析檢驗(yàn)

5、。
　　 三、結(jié)果：
　　 1方法學(xué)
　　 1.1 Puer、TMP、Rg1的測定方法學(xué)
　　 血漿及腦組織中Puer、TMP、Rg1均與內(nèi)標(biāo)和內(nèi)源性物質(zhì)分離良好。血漿內(nèi)Puer、TMP、Rg1和內(nèi)標(biāo)各待測物保留時(shí)間分別為3.16、2.18、3.59、2.59 min,腦勻漿中各待測物的保留時(shí)間分別為3.14、2.17、3.59、2.65 min。在12.50～5000.00 ng·mL-1線性范圍內(nèi)各待

6、測物在血漿及腦組織中的線性良好,最低定量限分別為10 ng·mL-1、12.5 ng·mL-1、10 ng·mL-1。血漿中萃取回收率各待測物>80.77％,腦勻漿中各待測物>78.13％,日間和日內(nèi)精密度在血漿中各待測物<10.27％,腦勻漿中各待測物低濃度<16.12％,中、高濃度<11.88％。
　　 1.2 HSYA的測定方法學(xué)
　　 血漿及腦組織內(nèi)HSYA均與內(nèi)標(biāo)和內(nèi)源性物質(zhì)很好的分離。HSYA和內(nèi)標(biāo)的出峰時(shí)間

7、分別為6.2 min和11.9 min。在40.00～2000.00 ng·mL-1線性范圍內(nèi)HSYA血漿及腦組織中線性良好,最低定量限均為40.00 ng·mL-1。血漿及腦組織內(nèi)HSYA的萃取回收率分別>85.07％、>83.49％；日內(nèi)精密度RSD分別<11.20％、<5.13％；日間精密度RSD分別<8.15％、<9.14％。
　　 2動(dòng)物實(shí)驗(yàn)
　　 Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ組中HSYA的AUCbrain/AUCblood分別

8、為0.694±0.044、0.98±0.054及1.64±0.082；Puer的AUC brain/AUC blood分別為0.58±0.11、0.61±0.04及0.78±0.04；TMP的AUC brain/AUC blood分別為0.00694±0.00085、0.0072±0.0010、0.014±0.0022。Rg1在血漿中的AUC0→12分別為9289.98±1750.48、13792.73+2065.88、15620.05

9、±2936.68,在腦組織中未被檢測到。
　　 四、結(jié)論：
　　 1方法學(xué)
　　 本實(shí)驗(yàn)方法可準(zhǔn)確、快速測定大鼠血漿及腦勻漿中HSYA、Puer、TMP、Rg1濃度,用以芳香開竅藥對腦得生主要活性成分透過BBB影響的考察。
　　 2動(dòng)物實(shí)驗(yàn)
　　 冰片促進(jìn)HSYA、Puer、TMP、Rg1吸收入血并增加HSYA、Puer、TMP腦組織內(nèi)濃度,可有效增加BBB的通透性；石菖蒲提取液抑制HSYA、Pu