VEGF-A對大鼠視網膜表達TGF-β1及CTGF的影響的研究.pdf

1、目的： 觀察玻璃體腔注射血管內皮生長因子-A(vascular endothelial growth factor-A，VEGF-A)后不同時間大鼠視網膜表達轉化生長因子-β1(transforming growth factor，TGF-β1)和結締組織生長因子(connective tissue growth factor，CTGF)的變化情況，探討二者在視網膜新生血管性疾病發(fā)病機制中的作用，為視網膜新生血管性疾病的臨床防治

2、提供基礎理論依據。 方法： 1.Wistar大鼠共33只，鼠齡12-14周，體重約250g，雌雄不限，均經裂隙燈、檢眼鏡檢查排除眼部疾病。隨機選擇24只作為處理組，剩余9只作為空白對照組(C組)，并隨機分為3個亞組。處理組右眼玻璃體腔注射含有100ngVEGF-A的0.1％BSA的PBS溶液3μl(A組)，左眼玻璃體腔注射0.1％BSA的PBS溶液3μl(B組)，C組不給任何處理，注射時發(fā)生玻璃體出血的眼不納入本研究。處

3、理組分別在注射后24、48、72小時(即A1-A3組、B1-B3組)，選取相應空白對照組亞組(即Cl-C3組)行10％水合氯醛腹腔注射麻醉。 2.摘除眼球，平行于視神經連續(xù)冰凍切片，HE染色，光鏡下觀察視網膜形態(tài)學變化，免疫組化SABC法觀察視網膜各層陽性染色情況。每只眼球選取2張結構完整的視網膜切片，每張切片隨機選取5個視野(×200倍)，Image-ProPlus6.0圖像處理分析軟件分析各組染色陽性區(qū)的平均累積光密度(in

4、tegratedopticdensity，IOD)。 3.運用SPSS11.5統(tǒng)計軟件，對不同處理組和空白對照組及不同時間點數據采用采用單因素方差分析，并用SNK檢驗及PostHoc的Tamhane'sT2進行組間比較，雙側檢驗，P<0.05差異具有統(tǒng)計學意義。 結果： 1.HE染色 A1組、B組和C組視網膜層次結構整齊分明，光感受器細胞內外節(jié)形態(tài)規(guī)整，內、外核層細胞核染色深紫，染色均勻，RPE細胞核呈淡

5、紫色，扁橢圓形，邊界清晰，染色均勻。隨著時間的推移，視網膜結構和變化不明顯。A2組視網膜厚度增加，神經節(jié)細胞腫脹，光感受器細胞內外節(jié)形態(tài)欠規(guī)整，結構欠清，RPE細胞腫脹變圓，但數量變化不明顯。A3較A2組變化不明顯。 2.免疫組織化學染色 C組CTGF免疫組化染色陽性部位主要在神經節(jié)細胞層(GCL)和內叢狀層(IPL)，為弱陽性。B組呈現輕度的全視網膜染色的增加，A組在GCL層表現為更強的CTGF染色。TGF-β1染色僅

6、在視網膜血管結構觀察到。TGF-β1染色在B組略有增強，A組與C組比較明顯增強。A組各亞組間CTGF表達陽性區(qū)的平均IOD差異有統(tǒng)計學意義(F=41.361，P=0.000)，進一步用SNK法進行組間比較，各亞組間差異均有統(tǒng)計學意義(P<0.05)；B組不同時間CTGF表達陽性區(qū)的平均IOD差異也有統(tǒng)計學意義(F=25.284，P=0.000)，進一步行SNK法檢驗，B1與B2、B2與B3組間差異均具有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。C組不

7、同時間CTGF表達陽性區(qū)平均IOD差異無統(tǒng)計學意義(F=0.002，P=0.998)。A組各亞組間TGF-β1表達陽性區(qū)的平均IOD差異有統(tǒng)計學意義(F=26.783，P=0.000)，進一步用SNK法進行組間比較，各亞組間差異均有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。B組不同時間TGF-β1表達陽性區(qū)的平均IOD差異也有統(tǒng)計學意義(F=27.644，P=0.000)，進一步行PostHoc的Tamhane'sT2法進行組間比較，B1與B2、B2

8、與B3組間差異均具有統(tǒng)計學意義(P<0.05).C組不同時間TGF-β1表達陽性區(qū)平均IOD差異無統(tǒng)計學意義(F=1.308，P=0.300)。不同處理后24小時，A1、B1、C1組CTGF及TGF-β1陽性區(qū)平均IOD差異無統(tǒng)計學意義(F1=3.482，P1=0.053；F2=0.604，P2=0.558)，尚可認為玻璃體腔注射VEGF-A后24小時尚未引起明顯CTGF及TGF-β1表達增高。注射后48小時，2種因子的表達達高峰，72

9、小時時較48小時下降。A2、B2、C2及A3、B3、C3組CTGF及TGF-β1陽性區(qū)平均IOD差異均有統(tǒng)計學意義(P<0.05)，SNK法各組間比較，CTGF及TGF-β1各組間均有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。 結論： 本實驗采用玻璃體腔注射的方法，研究外源性VEGF-A對大鼠視網膜表達CTGF和TGF-β1的影響，并通過免疫組織化學染色方法觀察TGF-β1及CTGF表達情況，發(fā)現外源性VEGF-A能誘導TGF-β1及