1型糖尿病大鼠腎臟和視網(wǎng)膜VEGF、CTGF的表達(dá)及坎地沙坦干預(yù)研究.pdf

1、目的:通過應(yīng)用鏈脲佐菌素誘導(dǎo)1型糖尿病大鼠模型,觀察糖尿病大鼠腎臟及視網(wǎng)膜中血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(VEGF)和結(jié)締組織生長(zhǎng)因子(CTGF)的表達(dá)水平,同時(shí)給予坎地沙坦干預(yù),探討VEGF、CTGF與早期糖尿病腎病及視網(wǎng)膜病變的關(guān)系,以及坎地沙坦對(duì)腎臟和視網(wǎng)膜保護(hù)的作用機(jī)制。
　　 方法:
　　 雄性Wistar大鼠36只,隨機(jī)分為3組,A組為正常對(duì)照組(NC組,n=12),B組為糖尿病組(DM組,n=12),C組坎地沙坦干預(yù)組

2、(DM-C組,n=12)。大鼠禁食12h后,DM、DM-C組一次性腹腔注射鏈脲佐菌素(streptozotocin,STZ)55mg/Kg,誘導(dǎo)1型糖尿病大鼠模型;NC組大鼠僅腹腔注射等體積檸檬酸緩沖液。3天后隨機(jī)血糖大于16.7mmol/L大鼠為造模成功;DM-C組給予坎地沙坦5mg·kg-1·d-1灌胃,NC組和DM組給予等容積生理鹽水灌胃。干預(yù)12周末,測(cè)量全部大鼠尾動(dòng)脈收縮壓(systolic blood pressure,SB

3、P),然后將大鼠置于代謝籠中收集24h尿液,并記尿量,用來測(cè)定尿白蛋白排泄量(urinary albumin excretion,UAE)、尿肌酐;稱量全部大鼠體重,然后處死,留取血標(biāo)本,測(cè)空腹血糖(fastingblood glucose,FBG)、血肌酐,計(jì)算內(nèi)生肌酐清除率(creatinine clearancerate,Ccr);切取左腎,去掉被膜后稱重,同時(shí)取出眼球,光鏡和透射電鏡下觀察腎臟形態(tài)學(xué)改變,光鏡下觀察視網(wǎng)膜形態(tài)學(xué)改

4、變,免疫組化法觀察腎臟及視網(wǎng)膜VEGF和CTGF的表達(dá),并應(yīng)用Image-Pro Plus圖像分析系統(tǒng)對(duì)病理切片和免疫組化切片進(jìn)行分析,測(cè)定腎小球平均截面積(MeanGlomerular Area,MGA)、腎小球內(nèi)PAS陽性染色面積;計(jì)算系膜基質(zhì)分?jǐn)?shù)(Mesangial Matrix Fraction,MMF)即PAS陽性染色面積/腎小球平均截面積,并且根據(jù)公式[β/K×(MGA)3/2]計(jì)算出腎小球平均體積(MeanGlomerul

5、ar Volume,MGV);切取右腎后置于-70℃液氮中凍存,Westernblot檢測(cè)腎臟VEGF及CTGF的表達(dá)水平。
　　 結(jié)果:
　　 實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí),NC組、DM組、DM-C組分別存活10只、8只、8只大鼠。
　　 1:空腹血糖(FBG)、24小時(shí)UAE、腎重指數(shù)(kidney weight/body weight,KW/BW)、內(nèi)生肌酐清除率(Ccr):與NC組相比,DM組和DM-C組大鼠FBG升高(P

6、＜0.01)、24小時(shí)UAE排泄增多(P＜0.01)、KW/BW升高(P＜0.01)、Ccr顯著升高(P＜0.01);與DM組相比,DM-C組大鼠的FBG無明顯差異,其余指標(biāo)均明顯降低(P＜0.01)。
　　 2:動(dòng)脈收縮壓(SBP):坎地沙坦干預(yù)12周末,三組間大鼠SBP無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＞0.05)。
　　 3:腎小球病理形態(tài)學(xué)改變:HE染色和PAS染色均顯示,NC組腎小球、小管間質(zhì)、腎血管未發(fā)現(xiàn)明顯異常。與NC組相比

7、,DM組大鼠的腎小球平均截面積(MGA)、腎小球平均體積(MGV)和系膜基質(zhì)分?jǐn)?shù)(MMF)均顯著增大(P＜0.01);腎小球內(nèi)PAS陽性物質(zhì)增多,系膜區(qū)增寬,系膜細(xì)胞增生;DM-C組與DM組相比上述表現(xiàn)均明顯改善(P＜0.01),但與NC組相比上述指標(biāo)仍增大(P＜0.01)。透射電鏡顯示:DM組大鼠腎小球基底膜不均勻增厚,可見足突增厚、融合;DM-C組腎小球基底膜增厚程度及足突融合程度均有所減輕。
　　 4:腎組織VEGF的表達(dá)

8、:免疫組化和Western blot檢測(cè)結(jié)果均顯示,NC組大鼠腎小球有少量VEGF的表達(dá),DM組大鼠腎小球及腎小管VEGF的表達(dá)明顯增加(P＜0.01);DM-C組較DM組腎小球及腎小管VEGF表達(dá)減弱(P＜0.01),但仍未達(dá)到正常水平(P＜0.01)。仍高(P＜0.01)。
　　 5:腎組織CTGF的表達(dá):免疫組化和Western blot檢測(cè)結(jié)果均顯示,NC組大鼠腎小球有少量CTGF表達(dá),DM組大鼠腎小球及腎小管CTGF表

9、達(dá)明顯增強(qiáng)(P＜0.01);DM-C組較DM組腎小球及腎小管CTGF表達(dá)明顯減低(P＜0.01),但與NC組相比表達(dá)
　　 6:視網(wǎng)膜病理形態(tài)學(xué)改變:HE染色顯示,NC組視網(wǎng)膜形態(tài)及結(jié)構(gòu)未發(fā)現(xiàn)明顯異常。與NC組相比,DM組大鼠的視網(wǎng)膜組織的厚度變薄,視神經(jīng)節(jié)細(xì)胞的數(shù)目明顯減少(P＜0.01);DM-C組與DM組相比上述表現(xiàn)均明顯改善(P＜0.01),但與NC組相比上述指標(biāo)仍增大(P＜0.01)。
　　 7:視網(wǎng)膜VEGF

10、、CTGF的表達(dá):免疫組化結(jié)果顯示,NC組大鼠視網(wǎng)膜組織有少量VEGF、CTGF的表達(dá),DM組大鼠視網(wǎng)膜組織VEGF、CTGF的表達(dá)明顯增加(P＜0.01);DM-C組較DM組視網(wǎng)膜組織VEGF、CTGF表達(dá)減弱(P＜0.01),但較NC組表達(dá)仍高(P＜0.01)。
　　 結(jié)論:
　　 1:在糖尿病腎病的早期,VEGF及CTGF在大鼠腎小球及腎小管的表達(dá)增加,腎小球系膜基質(zhì)積聚。
　　 2:糖尿病視網(wǎng)膜病變?cè)缙?