Rho-ROCK信號通路在Kisspeptin-54抑制滋養(yǎng)細(xì)胞浸潤的作用.pdf

1、目的：
　　 研究發(fā)現(xiàn)腫瘤抑制基因KISS-1及其蛋白肽Kisspeptin-54參與調(diào)控滋養(yǎng)細(xì)胞的浸潤行為。腫瘤細(xì)胞的浸潤行為與滋養(yǎng)細(xì)胞的極為相似,研究發(fā)現(xiàn)加入外源性mestastin(Kisspeptin-54)可導(dǎo)致腫瘤細(xì)胞間局部粘附里增加,遷移和浸潤能力下降,但此種抑制效應(yīng)可以被Rho激酶抑制劑Y-27632所抑制。Y-27632是選擇性ROCKⅡ抑制劑,ROCKⅡ是Rho/ROCK信號通路的下游靶蛋白。擬研究Kissp

2、eptin-54是否可以通過Rho/ROCK信號通路抑制滋養(yǎng)細(xì)胞的浸潤。
　　 方法：
　　 1、復(fù)蘇、培養(yǎng)JEG-3細(xì)胞系細(xì)胞至對數(shù)生長期,用不同濃度Kisspeptin-54(10nmol/L,100nmol/L,1000nmol/L),Kisspeptin-54抗體(10nmol/L,100nmol/L,1000nmol/L),Rho/ROCK信號通路抑制劑Y-27632(5umol/L,10umol/L,15um

3、ol/L,20umol/L,50umol/L)處理細(xì)胞24h,并且設(shè)立空白對照組及鹽水對照組。
　　 2、WesternBlot法檢測MMP-9,ERM,ROCKⅡ,Kisspeptin-54的表達(dá)。
　　 3、統(tǒng)計學(xué)方法:應(yīng)用SPSS16.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計分析,以均數(shù)士標(biāo)準(zhǔn)差表示定量資料數(shù)據(jù),組間比較采用單因素方差分析(ANOVA),認(rèn)為P＜0.05有統(tǒng)計學(xué)意義。
　　 結(jié)果：
　　 1、加入Kisspe

4、ptin-54對ROCKⅡ、MMP-9、ERM表達(dá)的影響:Kisspeptin-54能上調(diào)ROCKⅡ的表達(dá),下調(diào)MMP-9、ERM的表達(dá),與對照組相比有顯著統(tǒng)計學(xué)差異(P＜0.05),且隨著Kisspeptin-54濃度的增加,ROCKⅡ表達(dá)增加,MMP-9、ERM的表達(dá)下降。
　　 2、加入Kisspeptin-54抗體對Rho/ROCK信號通路中ROCKⅡ表達(dá)的影響:Kisspeptin-54抗體可以下調(diào)ROCKⅡ的表達(dá),與

5、對照組相比有顯著統(tǒng)計學(xué)差異(P＜0.05),且隨著Kisspeptin-54抗體濃度的增加,ROCKⅡ表達(dá)下降。
　　 3、加入Kisspeptin-54抗體對浸潤相關(guān)因子表達(dá)的影響:Kisspeptin-54抗體可以上調(diào)MMP-9,ERM的表達(dá),與對照組相比有顯著統(tǒng)計學(xué)差異(P＜0.05),且隨著Kisspeptin-54抗體濃度的增加,MMP-9,ERM表達(dá)增加,Kisspeptin-54表達(dá)下降。
　　 4、加入Y

6、-27632后對ROCKⅡ、MMP-9、ERM表達(dá)的影響:加入Y-27632后,ROCKⅡ、MMP-9、ERM的表達(dá)均下降,與對照組相比有顯著統(tǒng)計學(xué)差異(P＜0.05),且隨著Y-27632濃度的增加,抑制作用越強。
　　 5、加入Y-27632后對Kisspeptin-54的影響:加入Y-27632后,Kisspeptin-54表達(dá)不變,與對照組相比無顯著統(tǒng)計學(xué)差異(P＞0.05)。
　　 結(jié)論：
　　 Kis