缺氧對乳腺癌MDA-MB-435細胞細胞骨架重構(gòu)的影響以及Rho-ROCK信號通路的作用.pdf

1、研究背景：缺氧是實質(zhì)性腫瘤微環(huán)境的基本特征之一，有研究表明缺氧可以促進腫瘤的浸潤和轉(zhuǎn)移。細胞骨架的重構(gòu)是腫瘤細胞遷移過程中，黏附和運動能力改變的基礎(chǔ)，而小G蛋白家族(包括Rho，Rac和Cdc42)對細胞骨架重構(gòu)起到關(guān)鍵的調(diào)節(jié)作用。Rho相關(guān)相關(guān)蛋白激酶(Rho-associated kinase，ROCK)是Rho的主要效應(yīng)分子，激活后能夠增強細胞的運動能力.由此我們推測：缺氧引起乳腺癌細胞轉(zhuǎn)移能力增強可能和ROCK被激活、細胞骨架發(fā)

2、生改變而使細胞運動能力增強有關(guān)。 目的：觀察缺氧對細胞肌動蛋白細胞骨架重組、細胞黏附性和細胞運動能力的影響；探討Rho/ROCK信號通路在缺氧引起肌動蛋白細胞骨架重組過程中的作用。 方法：高轉(zhuǎn)移潛能的人乳腺癌細胞株(MDA-MB-435細胞)用于以下實驗.實驗分三組：(1)對照組：在37℃、5％CO2條件下培養(yǎng)；(2)缺氧組：置于37℃，含95％N：和5％CO2的條件下培養(yǎng)16h；(3)Y-27632+缺氧組：用Y-27

3、632(10μmol/L)預處理細胞1h，然后繼續(xù)缺氧培養(yǎng)16h。熒光染色法觀察細胞骨架的分布，免疫印跡法觀察細胞漿成分和細胞骨架成分中肌動蛋白的含量；噻唑藍比色法(MTT)檢測細胞對人工重組基底膜(Matrigel)的黏附能力：單層細胞劃痕實驗檢測細胞運動能力。結(jié)果：免疫熒光標記結(jié)果中，缺氧使MDA-MB-435細胞內(nèi)F-肌動蛋白含量增加、外周黏著斑樣結(jié)構(gòu)消失；胞漿和骨架蛋白的免疫印跡實驗中，缺氧時的骨架中肌動蛋白的含量增加，說明肌動