Rho-ROCK通路對(duì)人U87膠質(zhì)瘤細(xì)胞侵潤(rùn)轉(zhuǎn)移能力調(diào)節(jié)作用的體外實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：觀察Rho/ROCK細(xì)胞信號(hào)通路對(duì)體外培養(yǎng)的U87膠質(zhì)瘤細(xì)胞生長(zhǎng)、遷徙及侵潤(rùn)轉(zhuǎn)移能力的影響，并探討其作用機(jī)制。
　　方法：體外培養(yǎng)U87膠質(zhì)瘤細(xì)胞，U87細(xì)胞經(jīng)不同濃度（0、5、10、25、50、100μmol/L）的Y-27632作用不同時(shí)間（12h、24h、）后，采用四甲基偶氮唑藍(lán)(MTT)法檢測(cè)Y-27632對(duì)U87細(xì)胞生長(zhǎng)的影響。Transwell細(xì)胞運(yùn)動(dòng)、侵襲模型試驗(yàn)分別檢測(cè)U87細(xì)胞經(jīng)不同濃度（0、10、25、5

2、0μmol/L）的Y-27632處理12小時(shí)后的遷徙、侵襲能力的變化。應(yīng)用Rho激酶活性檢測(cè)試劑盒檢測(cè)不同濃度的Y-27632對(duì)細(xì)胞中ROCK活性的影響。蛋白免疫印記法檢測(cè)經(jīng)不同濃度（0、10、25、50μmol/L）的Y-27632處理12小時(shí)后的U87細(xì)胞中MMP-2、MMP-9蛋白水平的變化。
　　結(jié)果： MTT實(shí)驗(yàn)表明不同濃度的Y-27632對(duì)U87細(xì)胞的生長(zhǎng)增殖沒(méi)有明顯影響。Transwell細(xì)胞運(yùn)動(dòng)、侵襲模型實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯

3、示隨著Y-27632實(shí)驗(yàn)濃度的增加，U87細(xì)胞的運(yùn)動(dòng)、侵襲能力逐漸降低。Rho激酶活性檢測(cè)結(jié)果顯示隨著Y-27632濃度的提高，U87細(xì)胞中ROCK活性逐漸抑制，在一定范圍內(nèi)呈濃度依賴性。蛋白免疫印記法檢測(cè)表明隨著 Y-27632實(shí)驗(yàn)濃度的增加，細(xì)胞中 MMP-2、MMP-9蛋白水平逐漸降低，以MMP-2蛋白為著。
　　結(jié)論：體外實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，Rho/ROCK細(xì)胞信號(hào)通路的阻斷能降低 U87細(xì)胞的遷徙、侵襲能力，同時(shí)細(xì)胞中 MMP