低氧條件下CapG過表達在肺腺癌發(fā)生發(fā)展中的作用.pdf

1、背景和目的
　　 肺癌的發(fā)病率和病死率居各種惡性腫瘤之首，嚴(yán)重威脅著人類的健康，肺腺癌是肺癌常見的組織學(xué)類型，其發(fā)病比較隱匿，轉(zhuǎn)移早，病人常常以轉(zhuǎn)移病灶為首發(fā)癥狀。癌細胞轉(zhuǎn)移是造成肺腺癌患者生存率低、預(yù)后差的主要原因。目前研究肺腺癌轉(zhuǎn)移的分子機制，提高肺腺癌轉(zhuǎn)移的診斷和治療無疑具有重要的意義。大量研究顯示低氧是大多數(shù)實體瘤中一個普遍存在的現(xiàn)象，肺癌亦不例外，它參與調(diào)控腫瘤細胞增殖、遷移和黏附等基因的表達，是腫瘤轉(zhuǎn)移的重要促進因素

2、。腫瘤細胞的遷移與細胞運動密切相關(guān)，作為一種肌動蛋白結(jié)合蛋白，CapG蛋白過表達可導(dǎo)致成纖維細胞和內(nèi)皮細胞的運動性增強，我們之前的研究表明低氧可顯著促進CapG蛋白的表達，其高表達可明顯促進肺動脈平滑肌的遷移能力。CapG蛋白在胰腺癌、卵巢癌及口腔鱗狀細胞癌等腫瘤中的表達情況亦有報道，盡管結(jié)果不一，但皆提示其可能參與到腫瘤的發(fā)生發(fā)展中?；谝陨?，本研究擬首先在肺腺癌細胞中探討低氧與CapG的關(guān)系，后觀察常氧和低氧條件下靶向封閉CapG后

3、對肺腺癌細胞遷移和增殖的影響，同時探討CapG蛋白在肺腺癌組織中的表達情況和臨床意義，為探索阻斷肺腺癌侵襲轉(zhuǎn)移的方法及肺腺癌的治療提供有價值的資料。
　　 方法
　　 將人肺腺癌細胞株A549和H358各分為常氧組和低氧組，分別置于常氧(37℃，5％CO2，21%O2)和低氧(37℃，5%CO2，1%O2)條件下培養(yǎng)12h、24h、48h后，應(yīng)用蛋白免疫印跡方法對HIF-1α和CapG蛋白表達水平進行檢測；利用脂質(zhì)體20

4、00介導(dǎo)，將人工化學(xué)合成的特異性si-CapG和si-control瞬時轉(zhuǎn)染入A549和H358細胞后，分別在常氧和低氧條件下，采用細胞劃痕實驗和transwell遷移小室檢測細胞遷移能力的變化，采用四甲基偶氮唑鹽(MTT)比色法檢測細胞增殖能力的變化；將具備完整臨床資料的75例肺腺癌的癌組織標(biāo)本及相應(yīng)的癌旁組織標(biāo)本制作成150點組織芯片，應(yīng)用免疫組化SABC法檢測CapG蛋白的表達情況并分析其臨床意義。
　　 結(jié)果
　　

5、 與相對應(yīng)的常氧組比較，低氧處理12h后CapG蛋白表達水平無顯著差異，24h后其表達水平顯著增高，并持續(xù)至48h(P<0.05)；瞬時轉(zhuǎn)染si-CapG后，細胞劃痕和transwell遷移實驗均顯示常氧和低氧組的細胞遷移能力較隨機對照組顯著下降，尤以低氧條件下為著(P<0.01)，而細胞增殖能力無顯著變化；免疫組化結(jié)果顯示癌組織中CapG蛋白陽性表達率為40%，顯著高于癌旁組織的4%(P<0.01)；CapG蛋白的表達水平與患者的年

6、齡、肺腺癌T分期、臨床分期、分化程度均無統(tǒng)計學(xué)相關(guān)性，但在Ⅲ期和Ⅳ期的癌組織標(biāo)本中CapG的表達水平高于Ⅰ期和Ⅱ期(51.6%vs31.8%，P>0.05)，CapG蛋白的高表達與性別顯著相關(guān)，在男性中多見提示可能與吸煙史相關(guān)，且與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移呈顯著正相關(guān)(52.5%vs25.7%，P<0.05)。
　　 結(jié)論
　　 本研究結(jié)果表明低氧(1%O2)可顯著誘導(dǎo)CapG蛋白的表達，阻斷CapG蛋白表達可大大降低肺腺癌細胞的運動

7、遷移能力，在低氧環(huán)境中更為顯著，而對細胞增殖無顯著影響，提示低氧促進肺腺癌細胞的遷移和運動可能是通過調(diào)控與誘導(dǎo)CapG的表達，進而影響肌動蛋白細胞骨架來實現(xiàn)的，同時肺腺癌組織中CapG蛋白表達水平明顯高于癌旁組，伴有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的肺腺癌標(biāo)本中，其CapG蛋白表達顯著高于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者，在Ⅲ期和Ⅳ期標(biāo)本中，CapG蛋白的高表達較Ⅰ期和Ⅱ期標(biāo)本多，提示CapG在肺腺癌的發(fā)生發(fā)展中及促進肺腺癌細胞的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移方面起著重要作用，有可能作為阻斷肺腺