ppGalNac-T10在肺腺癌發(fā)生發(fā)展中的作用及機制的初步研究.pdf

1、研究目的：
　　多肽N-乙酰氨基半乳糖轉(zhuǎn)移酶10(pp GalNac-T10)是多肽N-乙酰氨基半乳糖轉(zhuǎn)移酶家族成員之一。根據(jù)已有研究推測pp GalNac-T10的異常表達可能與腫瘤侵襲轉(zhuǎn)移和惡性生長密切相關(guān)，在肺腺癌的組織芯片中發(fā)現(xiàn)pp GalNac-T10在癌組織的陽性率比癌旁組織中低，但是其細胞生物學(xué)功能及其分子作用機制仍需進一步探究。
　　研究方法：
　　1、為了選擇合適的細胞系進行本研究，首先通過qPCR和

2、Western blot實驗測定不同肺腺癌細胞系的GalNac-T10的mRNA水平和蛋白水平的表達量，以匹配相應(yīng)的過表達質(zhì)粒和干擾質(zhì)粒。2、A549和H322細胞分別轉(zhuǎn)染對應(yīng)干擾GalNac-T10質(zhì)粒和過表達GalNac-T10質(zhì)粒后，通過CCK8實驗檢測各組細胞的OD值變化，以檢測細胞的增殖能力。3、通過流式細胞儀，檢測不同處理組細胞的周期分布變化，細胞凋亡變化。研究GalNac-T10高表達或低表達后對A549和H322細胞的增

3、殖凋亡的影響。4、細胞轉(zhuǎn)染后通過Transwell侵襲實驗檢測各組細胞侵襲的細胞數(shù)，反映細胞的侵襲能力。研究pp GalNac-T10高表達或低表達后對對A549和H322細胞侵襲的影響。5、對已改變pp GalNac-T10的肺腺癌細胞系用基因表達譜芯片檢測，檢測因pp GalNac-T10表達改變而改變的顯著差異基因。6、對找出的差異基因進行生物信息學(xué)的數(shù)據(jù)分析，找出pp GalNac-T10影響肺腺癌的潛在下游基因，為進一步研究p

4、p GalNac-T10調(diào)控肺腺癌的分子機制打好基礎(chǔ)。
　　研究結(jié)果：
　　不同處理組的CCK8實驗表明，上調(diào)pp GalNac-T10在細胞中的表達會顯著抑制肺腺癌細胞的增殖，相反下調(diào)pp GalNac-T10也會一定程度上促進肺腺癌細胞的增殖。2.流式細胞周期實驗結(jié)果顯示上調(diào)pp GalNac-T10會使細胞停滯在G1期，抑制細胞增殖，下調(diào)pp GalNac-T10的結(jié)果正好相反，會促進細胞增殖，細胞凋亡實驗表明上調(diào)pp

5、 GalNac-T10會促進細胞凋亡。3.在Transwell侵襲實驗中，下調(diào)pp GalNac-T10表達的A549細胞中穿過基質(zhì)膠的細胞變多，說明細胞侵襲能力變強，上調(diào)pp GalNac-T10的H322細胞的侵襲能力一定程度上變?nèi)?。這些結(jié)果表明pp GalNac-T10可能在肺腺癌發(fā)生發(fā)展過程中起到抑制作用，與預(yù)實驗中組織芯片的結(jié)果一致。4.對相應(yīng)的H322細胞和A549細胞進行表達譜芯片分析，結(jié)果表明，上調(diào)pp GalNac-T

6、10處理組有932個顯著表達差異基因，下調(diào)pp GalNac-T10處理組有1073個顯著表達差異基因。pp GalNac-T10在TGF-beta通路中的潛在下游基因有AMH，BMP2，ID1，ID3，SMAD1，SMAD9，ACVR1，DCN，F(xiàn)ST，MAPK3，RHOA，在EGFR相關(guān)通路中的潛在下游基因有AXL，BAX,EGFR,EIF4E,ERBB3,FGF2,GAS6,IL6,MAPK3,NRAS,NRG1,PTEN,BCL

7、2L11,FGFR3,NF1,PDGFA,PDGFB,PIK3CB,VEGFA。5.在進一步探索性數(shù)據(jù)分析后，發(fā)現(xiàn)芯片數(shù)據(jù)中顯著差異基因的生物進程和通路富集主要涉及到p53信號通路和Fox0信號通路。
　　研究結(jié)論：
　　在細胞功能實驗中，上調(diào)pp GalNAc-T10會抑制肺腺癌細胞系的增殖和侵襲，也會促進凋亡，將細胞周期阻滯在G0/G1期;pp GalNAc-T10在肺腺癌中屬于抑癌基因。pp GalNAc-T10在TG