PHLPP1在乳腺癌發(fā)生發(fā)展中的作用及潛在機制的探討.pdf

1、目的：本研究試圖闡明PHLPP1在乳腺癌細胞發(fā)生發(fā)展中的作用以及潛在的分子機制。
　　方法：采用qRT-PCR技術(shù)檢測不同乳腺癌細胞株中PHLPP1的mRNA的表達情況，Western blot法檢測不同乳腺癌細胞株中PHLPP1和PHLPP2的蛋白質(zhì)表達情況。轉(zhuǎn)染PHLPP1高表達質(zhì)粒并建立穩(wěn)定表達細胞株。采用Western blot法檢測乳腺癌細胞株轉(zhuǎn)染重組質(zhì)粒后PHLPP1的蛋白質(zhì)表達水平的變化；分別觀察PHLPP1高表達對

2、乳腺癌細胞的細胞生物學(xué)影響；實時動態(tài)觀察轉(zhuǎn)染重組質(zhì)粒前后細胞的生長，以及觀察轉(zhuǎn)染重組質(zhì)粒前后細胞遷移能力和侵襲能力的變化，采用流式細胞術(shù)檢測轉(zhuǎn)染前后細胞周期的區(qū)別；將腫瘤細胞接種裸鼠，觀察裸鼠形成腫瘤的能力及大小的區(qū)別。
　　結(jié)果：PHLPP1蛋白在雌激素受體陽性乳腺癌細胞株MCF7和Her-2陽性細胞株SK-BR-3中呈高表達，在三陰性乳腺癌細胞株MDA-MB-231中呈低表達。PHLPP2在SK-BR-3中的表達較MDA-MB

3、-231和MCF-7細胞低。隨后在MDA-MB-231細胞中穩(wěn)定轉(zhuǎn)入外源性高表達PHLPP1質(zhì)粒，發(fā)現(xiàn)高表達PHLPP1后，MDA-MB-231細胞株的生長及、遷移、侵襲能力均受到限制。高表達PHLPP1以后，磷酸化Akt的Ser473位點受到抑制。將高表達PHLPP1的細胞株及對照細胞株同時接種到裸鼠皮下，觀察發(fā)現(xiàn)高表達PHLPP1組的小鼠成瘤率較低，且腫瘤較小。
　　結(jié)論：在三陰性乳腺癌細胞株中，PHLPP1通過抑制Akt的S