PHLPP1在乳腺癌發(fā)生發(fā)展中的作用及潛在機(jī)制的探討.pdf

1、目的：本研究試圖闡明PHLPP1在乳腺癌細(xì)胞發(fā)生發(fā)展中的作用以及潛在的分子機(jī)制。
　　方法：采用qRT-PCR技術(shù)檢測(cè)不同乳腺癌細(xì)胞株中PHLPP1的mRNA的表達(dá)情況，Western blot法檢測(cè)不同乳腺癌細(xì)胞株中PHLPP1和PHLPP2的蛋白質(zhì)表達(dá)情況。轉(zhuǎn)染PHLPP1高表達(dá)質(zhì)粒并建立穩(wěn)定表達(dá)細(xì)胞株。采用Western blot法檢測(cè)乳腺癌細(xì)胞株轉(zhuǎn)染重組質(zhì)粒后PHLPP1的蛋白質(zhì)表達(dá)水平的變化；分別觀察PHLPP1高表達(dá)對(duì)

2、乳腺癌細(xì)胞的細(xì)胞生物學(xué)影響；實(shí)時(shí)動(dòng)態(tài)觀察轉(zhuǎn)染重組質(zhì)粒前后細(xì)胞的生長(zhǎng)，以及觀察轉(zhuǎn)染重組質(zhì)粒前后細(xì)胞遷移能力和侵襲能力的變化，采用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)轉(zhuǎn)染前后細(xì)胞周期的區(qū)別；將腫瘤細(xì)胞接種裸鼠，觀察裸鼠形成腫瘤的能力及大小的區(qū)別。
　　結(jié)果：PHLPP1蛋白在雌激素受體陽(yáng)性乳腺癌細(xì)胞株MCF7和Her-2陽(yáng)性細(xì)胞株SK-BR-3中呈高表達(dá)，在三陰性乳腺癌細(xì)胞株MDA-MB-231中呈低表達(dá)。PHLPP2在SK-BR-3中的表達(dá)較MDA-MB

3、-231和MCF-7細(xì)胞低。隨后在MDA-MB-231細(xì)胞中穩(wěn)定轉(zhuǎn)入外源性高表達(dá)PHLPP1質(zhì)粒，發(fā)現(xiàn)高表達(dá)PHLPP1后，MDA-MB-231細(xì)胞株的生長(zhǎng)及、遷移、侵襲能力均受到限制。高表達(dá)PHLPP1以后，磷酸化Akt的Ser473位點(diǎn)受到抑制。將高表達(dá)PHLPP1的細(xì)胞株及對(duì)照細(xì)胞株同時(shí)接種到裸鼠皮下，觀察發(fā)現(xiàn)高表達(dá)PHLPP1組的小鼠成瘤率較低，且腫瘤較小。
　　結(jié)論：在三陰性乳腺癌細(xì)胞株中，PHLPP1通過(guò)抑制Akt的S