抗弓形蟲可溶性抗原的雞卵黃免疫球蛋白(IgY)檢測弓形蟲循環(huán)抗原的可行性研究.pdf

1、弓形蟲病是由剛地弓形蟲(Toxoplasma gondii)所引起的人畜共患病,廣泛流行于世界各地。弓形蟲病對孕產(chǎn)婦的危害已得到臨床醫(yī)務工作者公認。孕婦感染弓形蟲后,可通過胎盤將弓形蟲垂直傳播給胎兒,造成流產(chǎn)、死胎、畸胎、新生兒智力發(fā)育不全、嬰兒先天性弓形蟲病等。近年來隨著對艾滋病、惡性腫瘤等免疫功能損傷患者因感染弓形蟲而導致死亡報道的增多而逐漸引起重視。因此,早期診斷弓形蟲病對于預防異常胎兒及將弓形蟲病對孕婦的危害降到最低限度具有重要

2、的意義。目前臨床常用病原學檢查、血清學試驗及分子生物學等方法診斷弓形蟲病。動物接種分離和細胞培養(yǎng)操作復雜,陽性率又不高,現(xiàn)代分子生物學方法對實驗室條件要求較高且需要經(jīng)過嚴格訓練的專門技術人員,血清學方法檢測相應的抗體雖然操作簡單,特異性好,靈敏度高,但不能區(qū)分現(xiàn)癥感染和既往感染,因此研制檢測能代表現(xiàn)癥感染的循環(huán)抗原的技術是一項迫切的任務。
　　研究證實 IgY具有特異性抗體產(chǎn)量高、不與哺乳動物免疫球蛋白發(fā)生血清交叉反應、制備及提純

3、簡單、性質穩(wěn)定等特點。為了探討 IgY在弓形蟲病診斷中的應用價值,本研究采用物理過濾方法制備弓形蟲可溶性抗原,再用這種抗原免疫雞,制備并純化特異性抗弓形蟲可溶性抗原的雞卵黃免疫球蛋白(Eggyolk immunoglobulin,IgY),BCA法測定蛋白含量,進行十二烷基磺酸鈉-聚丙烯酰胺凝膠電泳(SDS-PAGE)分析, ELISA法行抗弓形蟲可溶性抗原IgY與弓形蟲可溶性抗原結合試驗,同時行感染弓形蟲大鼠血清與弓形蟲可溶性抗原結合

4、試驗,通過兩次試驗比較,探討抗弓形蟲可溶性抗原IgY應用于弓形蟲病診斷的可能性。
　　采用物理過濾法制備弓形蟲可溶性抗原,濃度為550.5μg/ml。每枚雞蛋經(jīng)EGGstract IgY Purication System提取及純化后,抗弓形蟲IgY濃度為5252.3μg/ml。純化后的IgY經(jīng)還原型SDS-PAGE鑒定,有3條主帶,分子量分別為80kDa、60kDa、38kDa,非還原型SDS-PAGE鑒定,有2條主帶,分子量分

5、別為180kDa、60kDa。ELISA結果顯示,當抗弓形蟲可溶性抗原IgY稀釋度為1:200時,可檢出0.13～0.25μg/100μl的弓形蟲可溶性抗原。而相同稀釋度的感染弓形蟲大鼠血清只可檢出1μg/100μl的弓形蟲可溶性抗原?？构蜗x可溶性抗原 IgY稀釋度為1:10時可檢測出0.02μg/100μl的弓形蟲可溶性抗原。以上結果提示,基于抗弓形蟲IgY檢測弓形蟲的循環(huán)抗原是可行的。
　　抗弓形蟲雞卵黃抗體與弓形蟲抗原結合