弓形蟲重組抗原P22的制備及應(yīng)用.pdf_第1頁(yè)
已閱讀1頁(yè)，還剩51頁(yè)未讀， 繼續(xù)免費(fèi)閱讀

下載本文檔

版權(quán)說(shuō)明：本文檔由用戶提供并上傳，收益歸屬內(nèi)容提供方，若內(nèi)容存在侵權(quán)，請(qǐng)進(jìn)行舉報(bào)或認(rèn)領(lǐng)

文檔簡(jiǎn)介

1、目的:應(yīng)用基因重組技術(shù)獲敏感性、特異性高的弓形蟲速殖子主要表面抗原P22的融合蛋白,應(yīng)用于弓形蟲感染免疫學(xué)診斷.方法:采用PCR方法,以弓形蟲RH株DNA為模板,擴(kuò)增編碼主要表面抗原P22的基因片段.將該基因片段插入T/A克隆,經(jīng)PCR、雙酶切和測(cè)序鑒定,獲陽(yáng)性克隆加以擴(kuò)增,試劑盒抽提陽(yáng)性克隆.雙酶切后純化目的片段,再將其與原核表達(dá)載體pET-32a按一定比例在T4連接酶的作用下重組.用PCR結(jié)合雙酶切的方法鑒定,核酸測(cè)序驗(yàn)證.將構(gòu)建好

2、的原核表達(dá)載體pET-32a/P22轉(zhuǎn)入表達(dá)菌株BL21中,用一定濃度的IPTG誘導(dǎo)表達(dá),SDS-PAGE觀察表達(dá)效果,Western blot對(duì)融合蛋白進(jìn)行鑒定.將重組菌表達(dá)產(chǎn)物溶于尿素中,通過(guò)親和層析的方法得到P22蛋白,以分步洗滌和透析等方法逐步洗脫尿素,純化產(chǎn)物經(jīng)氧化/還原型谷胱苷肽復(fù)性后即為重組蛋白.以該蛋白作抗原,與弓形蟲粗抗原比較檢測(cè)弓形蟲感染兔血清和其他各種疾病患者血清.結(jié)論:成功獲得重組抗原P22,以此作抗原檢測(cè)弓形蟲

溫馨提示

  • 1. 本站所有資源如無(wú)特殊說(shuō)明，都需要本地電腦安裝OFFICE2007和PDF閱讀器。圖紙軟件為CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.壓縮文件請(qǐng)下載最新的WinRAR軟件解壓。
  • 2. 本站的文檔不包含任何第三方提供的附件圖紙等，如果需要附件，請(qǐng)聯(lián)系上傳者。文件的所有權(quán)益歸上傳用戶所有。
  • 3. 本站RAR壓縮包中若帶圖紙，網(wǎng)頁(yè)內(nèi)容里面會(huì)有圖紙預(yù)覽，若沒(méi)有圖紙預(yù)覽就沒(méi)有圖紙。
  • 4. 未經(jīng)權(quán)益所有人同意不得將文件中的內(nèi)容挪作商業(yè)或盈利用途。
  • 5. 眾賞文庫(kù)僅提供信息存儲(chǔ)空間，僅對(duì)用戶上傳內(nèi)容的表現(xiàn)方式做保護(hù)處理，對(duì)用戶上傳分享的文檔內(nèi)容本身不做任何修改或編輯，并不能對(duì)任何下載內(nèi)容負(fù)責(zé)。
  • 6. 下載文件中如有侵權(quán)或不適當(dāng)內(nèi)容，請(qǐng)與我們聯(lián)系，我們立即糾正。
  • 7. 本站不保證下載資源的準(zhǔn)確性、安全性和完整性, 同時(shí)也不承擔(dān)用戶因使用這些下載資源對(duì)自己和他人造成任何形式的傷害或損失。

最新文檔

評(píng)論

0/150

提交評(píng)論