益生元對(duì)CRS大鼠腸上皮緊密連接及屏障功能的影響.pdf

1、本文主要觀察了加入GOS益生元后，從對(duì)粘膜機(jī)械性屏障的作用來(lái)研究該微生態(tài)制劑對(duì)CRS大鼠腸屏障保護(hù)作用及其作用機(jī)制。全文分為3部分進(jìn)行研究。 1、CRS大鼠動(dòng)物模型的建立。實(shí)驗(yàn)前大鼠禁食24小時(shí)，自由飲水。在乙醚輕度麻醉下，將大鼠置于大鼠固定器中，限制其活動(dòng)，置于4度冰箱，束縛3個(gè)小時(shí)。HE染色觀察，模型誘發(fā)后，腸粘膜病理?yè)p害明顯：腸粘膜變薄、萎縮，粘膜淺層有部分壞死，上皮細(xì)胞脫落，部分絨毛頂端吲有層有明顯充血水腫，腸粘膜上皮細(xì)

2、胞與固有層間距離增寬等。沒(méi)有模型大鼠死亡，該方法可以成功建立應(yīng)激動(dòng)物模型，能迅速引起腸道粘膜通透性改變，重復(fù)性好。 2、益生元對(duì)CRS大鼠腸屏障通透性和機(jī)械屏障改變的影響。 2.1 益生元對(duì)CRS大鼠腸屏障通透性影響。Wistar大鼠隨機(jī)分為四組：A組：對(duì)照組(基礎(chǔ)飲食/假應(yīng)激)，B組：益生元+假應(yīng)激，C組：基礎(chǔ)飲食+CRS，以及D組：益生元+CRS。各CRS模型組的血漿二胺氧化酶(diamine oxidase，DAO

3、)活性顯著高于對(duì)照組，提示CRS應(yīng)激時(shí)，腸粘膜細(xì)胞有損傷、壞死，DAO進(jìn)入外周血導(dǎo)致血漿DAO活性增高；C組(基礎(chǔ)飲食+CRS)活性顯著高于D組(GOS+CRS)，說(shuō)明添加GOS雖然不能完全逆轉(zhuǎn)CRS時(shí)腸粘膜損傷，但可以減輕腸粘膜受損的程度，降低血漿DAO水平。 2.2 益生元對(duì)小腸粘膜機(jī)械屏障改變的影響。腸粘膜原位細(xì)胞凋亡的檢測(cè)結(jié)果顯示，各CRS組的凋亡指數(shù)(apoptosis index，AI)顯著高于對(duì)照組，說(shuō)明正常大鼠的

4、腸上皮存在自發(fā)的凋亡現(xiàn)象，而CRS大鼠腸上皮凋亡明顯增加，添加益生元GOS的D組的AI顯著低于未添加GOS的C組，說(shuō)明添加GOS有助于減少小腸粘膜上皮細(xì)胞凋亡的發(fā)生，有利于維持腸粘膜機(jī)械屏障。 3、益生元對(duì)大鼠腸上皮細(xì)胞間緊密連接結(jié)合蛋白的作用機(jī)制。采用免疫組化檢測(cè)小腸上皮細(xì)胞間緊密連接結(jié)合蛋白o(hù)ccludin蛋白的表達(dá)水平，結(jié)果顯示：各CRS組occludin蛋白表達(dá)顯著低于對(duì)照組，添加益生元GOS的D組表達(dá)水平顯著低于未添加

5、GOS的C組，A組和添加GOS的B組大鼠腸上皮細(xì)胞間緊密連接蛋白o(hù)ccludin蛋白的表達(dá)水平的差異沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)occludinmRNA水平，各CRS組occludin mRNA表達(dá)顯著低于對(duì)照組，未添加GOS的C組表達(dá)水平顯著低于添加益生元GOS的D組，A組和添加GOS的B組大鼠腸上皮細(xì)胞間緊密連接蛋白o(hù)ccludin mRNA的表達(dá)水平的差異沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。添加GOS可以增加occludin蛋白表達(dá)和mRN