Cajal間質(zhì)細(xì)胞及P物質(zhì)在大鼠脊髓損傷后腸功能障礙中的作用.pdf

1、目的:
　　脊髓損傷(Spinal cord injury，SCI)可致患者感覺、運(yùn)動(dòng)功能喪失，自主神經(jīng)功能障礙。在自主神經(jīng)功能障礙中，腸功能障礙嚴(yán)重影響患者的生活質(zhì)量，被認(rèn)為是需要最優(yōu)先、迫切解決的問題之一。既往研究顯示，脊髓損傷后腸功能障礙與神經(jīng)遞質(zhì)-P物質(zhì)的變化有關(guān)，但是否存在其受體的變化并不清楚。另外，Cajal間質(zhì)細(xì)胞(interstitial cells of cajal，ICC)作為胃腸道慢波的起搏細(xì)胞，與胃腸電活動(dòng)

2、傳播、神經(jīng)遞質(zhì)傳遞等密不可分，它是否參與脊髓損傷后腸功能障礙的發(fā)生尚未見報(bào)道。因此，通過動(dòng)物實(shí)驗(yàn)來研究脊髓損傷后腸功能障礙中P物質(zhì)及其受體NK1R以及ICC的變化十分必要。在成功建立脊髓損傷模型的基礎(chǔ)上，觀察大鼠脊髓損傷后脊髓及結(jié)腸組織的病理變化;檢測(cè)脊髓損傷后結(jié)腸生物電活動(dòng)以及ICC的變化;研究脊髓損傷后脊髓及結(jié)腸組織中P物質(zhì)及其受體的變化，進(jìn)一步探討脊髓損傷后腸功能障礙的形成機(jī)制。
　　方法:
　　1.大鼠脊髓損傷模型的

3、建立。采用改良Allen裝置以10g·25cm強(qiáng)度打擊大鼠T10硬脊膜，建立大鼠脊髓損傷模型。
　　2.行為學(xué)檢測(cè)。以正常組大鼠為參照，采用BBB評(píng)分觀察大鼠行為學(xué)變化，通過比較篩選出造模后BBB評(píng)分為“0-1”的大鼠進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。
　　3.一般觀察。以假手術(shù)組大鼠為參照，肉眼觀察脊髓損傷后結(jié)腸的變化。
　　4.病理學(xué)觀察。以正常組、假手術(shù)組大鼠為參照，對(duì)SCI后脊髓損傷組織行EC染色，對(duì)SCI后大鼠近端結(jié)腸組織行HE染色

4、，觀察其病理變化特點(diǎn)。
　　5.結(jié)腸生物電活動(dòng)檢測(cè)。以正常組、假手術(shù)組大鼠為參照，利用生物電記錄儀檢測(cè)SCI后1周、2周、4周大鼠近端結(jié)腸生物電活動(dòng)變化。
　　6.ICC檢測(cè)。以正常組、假手術(shù)組大鼠為參照，利用免疫熒光、Western Blot檢測(cè)SCI后1周、2周、4周大鼠結(jié)腸組織中ICC的變化。
　　7.P物質(zhì)及其受體NK1R檢測(cè)。以正常組、假手術(shù)組大鼠為參照，利用免疫熒光雙標(biāo)、Western Blot分別檢測(cè)SC

5、I后1周、2周、4周大鼠脊髓和結(jié)腸組織中P物質(zhì)及其受體NK1R的變化。
　　結(jié)果:
　　1.行為學(xué)檢測(cè):BBB評(píng)分:脊髓損傷后大鼠BBB功能評(píng)分為0-1分，提示脊髓損傷后大鼠雙下肢完全癱瘓。
　　2.一般觀察:脊髓損傷后結(jié)腸組織充血、水腫明顯，腸腔內(nèi)可見較多干結(jié)糞粒。
　　3.病理學(xué)觀察:(1)EC染色:正常組、假手術(shù)組中大鼠脊髓白質(zhì)髓鞘分布均勻，排列緊密;損傷組大鼠脊髓損傷處白質(zhì)脫髓鞘明顯，局部空洞形成。(2)

6、HE染色:正常組、假手術(shù)組大鼠近端結(jié)腸絨毛上皮細(xì)胞排列整齊;損傷組大鼠近端結(jié)腸絨毛上皮細(xì)胞倒伏、脫落，粘膜層及肌層的厚度增加。
　　4.結(jié)腸生物電活動(dòng)檢測(cè):正常組、假手術(shù)組大鼠近端結(jié)腸生物電活動(dòng)較規(guī)律;損傷組近端結(jié)生物電紊亂，振幅變異較大，且波形較不穩(wěn)定。
　　5.ICC檢測(cè):脊髓打擊損傷1周時(shí)結(jié)腸組織內(nèi)Cajal間質(zhì)細(xì)胞陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)目為57.38±4.69，較正常組、假手術(shù)組明顯減少(P＜0.01）;損傷2周時(shí)結(jié)腸組織內(nèi)Ca

7、jal間質(zhì)細(xì)胞陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)目為32.26±3.62，與正常組和假手術(shù)相比，其陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)明顯減少(P＜0.01）;損傷4周時(shí)結(jié)腸組織Cajal間質(zhì)細(xì)胞陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)目為25.07±3.05，明顯少于正常組、假手術(shù)組(P＜0.01)。脊髓打擊損傷后結(jié)腸組織中c-kit蛋白表達(dá)呈現(xiàn)逐漸降低的趨勢(shì)，其中，損傷4周時(shí)c-kit蛋白表達(dá)為0.409±0.117，與正常組相比，其表達(dá)量明顯減少(P＜0.01）。
　　6.P物質(zhì)檢測(cè):打擊損傷組1周時(shí)脊

8、髓損傷上段前角P物質(zhì)表達(dá)為0.158±0.060，與正常組、假手術(shù)組相比未見明顯差別(P＞0.05）;2周時(shí)P物質(zhì)在脊髓損傷上段前角表達(dá)為0.323±0.098，較正常組、假手術(shù)組明顯增加(P＜0.01);4周時(shí)P物質(zhì)在脊髓損傷上段前角表達(dá)為0.199±0.048，與正常組、假手術(shù)組相比未見明顯差別(P＞0.05）。脊髓打擊損傷1周時(shí)P物質(zhì)在脊髓損傷下段前角表達(dá)為0.090±0.009，與正常組、假手術(shù)組相比有所減少(P＜0.05）;2

9、周時(shí)P物質(zhì)在脊髓損傷下段前角表達(dá)為0.280±0.027，明顯高于正常組、假手術(shù)組(P＜0.01）;4周時(shí)脊髓損傷下段前角P物質(zhì)表達(dá)為0.129±0.022，與正常組、假手術(shù)組相比未見明顯差別（P＞0.05）。脊髓打擊損傷1周后結(jié)腸組織P物質(zhì)為0.239±0.091，與正常組、假手術(shù)組相比，P物質(zhì)含量減少(P＜0.05);脊髓打擊損傷2周時(shí)結(jié)腸組織P物質(zhì)含量為0.233±0.056，較正常組、假手術(shù)組明顯減少(P＜0.01）;脊髓打擊損

10、傷4周時(shí)結(jié)腸組織中P物質(zhì)含量為為0.206±0.041，明顯少于正常組、假手術(shù)組(P＜0.01)。
　　7.NK1R檢測(cè):大鼠脊髓損傷后，脊髓組織中NK1R表達(dá)隨時(shí)相點(diǎn)變化呈現(xiàn)先減少后增加的趨勢(shì)。其中，損傷1天時(shí)脊髓NK1R表達(dá)最低，為0.978±0.414;損傷28天時(shí)脊髓NK1R表達(dá)為1.771±0.685，與假手術(shù)組相比，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。
　　結(jié)論:
　　1.大鼠脊髓損傷后結(jié)腸腸腔內(nèi)可見較多干結(jié)