基因工程創(chuàng)建無側(cè)芽煙草的初步研究.pdf

1、打頂抹芽是優(yōu)質(zhì)烤煙種植過程中一項(xiàng)重要的生產(chǎn)技術(shù)措施。煙草在一定的生長時(shí)期必須打頂，而打頂后會(huì)萌生大量的側(cè)芽。側(cè)芽耗費(fèi)營養(yǎng)，會(huì)降低煙葉的品質(zhì)和產(chǎn)量，因此必須抹掉側(cè)芽。人工抹芽耗費(fèi)人力和物力，提高了煙葉生產(chǎn)成本。打頂后施用化學(xué)藥劑可抑制腋芽生長，降低了煙葉生產(chǎn)勞動(dòng)強(qiáng)度。但化學(xué)藥劑需要成本，且會(huì)造成環(huán)境污染。用基因工程方法創(chuàng)建無側(cè)芽的煙草，則有可能從根本上解決上述問題。 陳興江(2005)根據(jù)番茄LS基因進(jìn)行同源克隆了煙草TLS基因的

2、部分片段749bp，與番茄的LS氨基酸序列同源性達(dá)92％，利用傷誘導(dǎo)啟動(dòng)子構(gòu)建的TLS基因的RNAi載體并轉(zhuǎn)化煙草，可能因TLS基因在愈傷組織中的表達(dá)受到抑制而無法得到再生芽. 本研究通過間接誘導(dǎo)途徑對其方案進(jìn)行完善，首先從pOpOn2.1載體克隆了轉(zhuǎn)錄因子LhG4，構(gòu)建了一個(gè)組成型的花椰菜花葉病毒35S啟動(dòng)子表達(dá)轉(zhuǎn)錄因子LhG4的表達(dá)載體，同時(shí)構(gòu)建了一個(gè)LhG4能識(shí)別結(jié)合的pOp6啟動(dòng)子的RNAi-TLS表達(dá)載體：由于陳興江所

3、構(gòu)建載體的酶切位點(diǎn)無法與pOpOffl的多克隆位點(diǎn)匹配，所以先根據(jù)已知序列擴(kuò)增了TLS基因，通過Gateway技術(shù)，BP、LR反應(yīng)后將其最終克隆到pOpOffl載體上，構(gòu)建了.POP6啟動(dòng)子的TLS的RNAi載體。然后將這兩個(gè)載體分別進(jìn)行煙草轉(zhuǎn)化。轉(zhuǎn)基因成功后將這兩個(gè)轉(zhuǎn)基因材料進(jìn)行人工授粉雜交，其F1即有望獲得無側(cè)芽煙草。目前，利用這兩個(gè)載體轉(zhuǎn)化煙草的部分工作已經(jīng)進(jìn)入壯苗培養(yǎng)階段。 我們擬利用傷誘導(dǎo)基因AOS的啟動(dòng)子替換組成型的