基于納米金和滾環(huán)放大的生化分析新方法研究.pdf

1、湖南大學博士學位論文基于納米金和滾環(huán)放大的生化分析新方法研究姓名：張松柏申請學位級別：博士專業(yè)：分析化學指導教師：沈國勵俞汝勤20090601幕f納米會和滾環(huán)放人的生化分析新方法研究苯二胺的電聚合膜，為傳感界面的構建提供了一個富含氨基的穩(wěn)固基底。用戊二醛作為交聯(lián)劑，將胱胺偶合在修飾電極表面后，金納米顆粒通過自組裝修飾到所得電極表面。利用金納米顆粒的獨特性質，抗體可以通過氨基金的親和力固定到納米會粒子上，并具有高的負載量和高的免疫活性。引

2、入模型分析物后，二茂鐵標記的抗體通過抗體抗原的特異反應結合到傳感界面上，產(chǎn)生氧化還原信號，峰值與分析物的量成比例關系。在優(yōu)化的實驗條件下，我們提出的檢測方法其檢測下限可低至10pg／ml，實現(xiàn)了對免疫物質的高靈敏檢測。隨后，我們還將金納米顆粒應用于核酸和小分子的檢測，希望實現(xiàn)高靈敏和快速檢測的目的。在第4章，提出了一種基于納米金熒光淬滅的一步均相DNA雜交檢測的新方法。納米金顆粒表面修飾有5’端硫基修飾的寡核苷酸鏈(納米顆粒探針序列)，

3、該核苷酸鏈3’端標記著帶負電荷的熒光染料分子FAM。FAM標記的探針序列與同帶負電荷的納米金顆粒之間的靜電相斥作用使得納米顆粒探針序列保持伸展狀態(tài)。體系中加入互補的目標序列與探針序列雜交使得探針序列從原柬的伸展型轉換成拱狀型，從而使熒光基團與納米金顆?？拷?。結果熒光被納米金顆粒有效地淬滅，熒光淬滅效率與目標序列的濃度相關，由此可實現(xiàn)對樣品中的目標序列的定量檢測?；诮鸺{米顆粒受表面電荷等周圍環(huán)境因素影響容易團聚的原理，在第5章發(fā)展了一種

4、新型非標記的過氧化氫比色檢測系統(tǒng)。將H202加入鄰苯二胺(OPDA)／辣根過氧化物酶(HRP)的溶液中。反應充分后再加入納米金溶液，混合溶液顏色由紅色快速地變?yōu)樗{色，且在420nm處有明顯的吸收峰。這是由于在辣根過氧化物酶的催化下，鄰苯二胺被過氧化氫氧化，生成偶氮苯，進而引發(fā)納米金顆粒的團聚。納米合的團聚程度與420nm處吸收峰的強度均隨H202濃度增加而增大。用這種方法檢測H202，用肉眼直接半定量分析其檢測下限為10M，用紫外可見吸

5、附光譜法定量檢測，檢測下限可達06M。該法簡便有效，同樣適用于其他物質的檢測，如葡萄糖，膽固醇等等，為新型生化檢測系統(tǒng)的研制提供了新思路。(2)基于滾環(huán)放大的生化分析方法研究。利用連接滾環(huán)放大反應系統(tǒng)可在恒溫下獲得大量與環(huán)形模板互補的重復序列這一特點，在第6章提出了一種基于連接滾環(huán)擴大和嵌入亞甲基藍的非標記、高靈敏的單核苷多態(tài)性檢測方法。通過連接酶識別目標DNA上的點突變而產(chǎn)生的環(huán)形模板，在恒溫下可以通過Phi29DNA聚合酶進行擴增，