缺血后處理對肝臟冷-熱缺血再灌注損傷及細胞凋亡的保護作用.pdf

1、第一部分缺血后處理對肝臟冷/熱缺血再灌注損傷和細胞凋亡的保護作用及其機制。 研究目的:探討缺血后處理對肝臟缺血再灌注損傷和細胞凋亡保護作用及其機制。 研究方法:參照Nauta等所描述的方法建立大鼠部分肝臟30分鐘熱缺血模型，并根據(jù)Kamada等所描述的方法進行大鼠肝移植手術(shù)來建立肝臟2小時冷缺血模型。動物分組： 1．Sham組：入腹后僅分離肝十二指腸韌帶，但不阻斷肝門血供； 2．熱缺血再灌注損傷實驗2.1

2、 IRI組：單純30分鐘熱缺血后灌注，無其他干預(yù)； 2.2 IPO組：在30分鐘熱缺血后，長時間灌注前給予3個循環(huán)的“30秒灌注-30秒再缺血”缺血后處理； 3．冷缺血再灌注損傷實驗3.1 IRI組：供肝2小時冷缺血后開放血流灌注，無其他干預(yù)； 3.2 IP0組：在供肝2小時冷缺血后，受體結(jié)束無肝期開始長時間灌注起始階段，給予3個循環(huán)的“30秒灌注-30秒再缺血”缺血后處理： 各組在再灌注后3小時后，采集

3、樣本檢測血清AST、ALT水平，膽汁葡萄糖含量、GGT水平，肝臟組織學(xué)及超微結(jié)構(gòu)改變，并采用雙抗體夾心ABC-ELISA法檢測血清中腫瘤壞死因子α(TNF-α)，白介素-1β(IL-1β)含量；采用化學(xué)比色法測定肝組織中丙二醛(MDA)含量，黃嘌呤氧化酶法測定肝組織中超氧化物歧化酶(SOD)活性；采用免疫組化檢測檢測肝細胞Fas基因的表達，流式細胞技術(shù)檢測細胞凋亡。對同一模型中各組的結(jié)果進行對比性分析。 研究結(jié)果: 1．

4、在熱缺血和冷缺血模型中，IPO組和IRI組的ALT和AST水平明顯高于Sham組(P<0.01)，并且IPO組的轉(zhuǎn)氨酶水平低于IRI組(P<0.05)。 2．在熱缺血和冷缺血模型中，IPO組和IRI組的膽汁葡萄糖和GGT水平都高于Sham組(P<0.05)；并且IP0組的膽汁葡萄糖和GGT水平低于IRI組(P<0.05)。 3．在熱缺血和冷缺血模型中，IPO組和IRI組肝臟組織學(xué)，超微結(jié)構(gòu)改變及中性粒細胞浸潤浸潤程度都重

5、于Sham組；但IPO組要輕于IRI組。 4．在熱缺血和冷缺血模型中，IPO組和IRI組的TNF-α和IL-lβ水平明顯高于Sham組(P<0.01)，并且IPO組的TNF-α和IL-1β水平低于IRI組(P(0.05)。 5．在熱缺血和冷缺血模型中，IPO組和IRI組的SOD水平都明顯低于Sham組(P<0.05)；并且IPO組的SOD水平高于IRI組(P(0.05)。而IPO組和IRI組的MDA水平都明顯高于Sha

6、m組(P<0.05)；并且IPO組的MDA水平低于IRI組(P(0.05)。 6．在熱缺血和冷缺血模型中，IPO組和IRI組的肝臟細胞Fas陽性表達面積百分率都明顯高于Sham組(P<0.01)，并且IPO組的Fas陽性表達面積百分率低于IRI組(P(0.05)。 7．在熱缺血和冷缺血模型中，IPO組和IRI組的肝臟細胞凋亡率都明顯高于Sham組(P(0.01)，并且IPO組的AI低于IRI組(P0.05)。 結(jié)

7、論: 1．缺血后處理對肝臟的冷/熱缺血再灌注損傷及細胞凋亡具有一定的保護作用。 2．缺血后處理通過抑制中性粒細胞的聚集；減少SOD失活，從而清除氧自由基；減少炎性細胞因子TNF-α和IL-1β的釋放來發(fā)揮其對肝臟缺血再灌注損傷的保護作用。 3．缺血后處理通過減少炎性細胞因子的釋放，清除氧自由基，抑制促凋亡基因Fas的表達來減輕肝臟冷/熱缺血再灌注后的細胞凋亡。第二部分 IPO、IPC、IPC-IPO對肝臟缺血再灌

8、注損傷和細胞凋亡保護作用的對比研究研究目的對比研究缺血后處理(IP0)與缺血預(yù)處理(IPC)對肝臟缺血再灌注損傷和細胞凋亡的保護作用；并分析缺血后處理與缺血預(yù)處理聯(lián)合應(yīng)用(IPC-IPO)是否能更為有效的減輕肝臟冷/熱缺血再灌注損傷。 參照Nauta等所描述的方法建立大鼠部分肝臟30分鐘熱缺血模型，并根據(jù)Kamada等所描述的方法進行大鼠肝移植手術(shù)來建立肝臟2小時冷缺血模型。熱缺血和冷缺血模型各分為4組： IRI組：單純

9、30分鐘熱缺血或2小時冷缺血后再灌注，無其它干預(yù)； IPC組：在冷/熱缺血開始前，給予1個循環(huán)的"5分鐘缺血-5分鐘再灌注"的缺血預(yù)處理； IPO組：結(jié)束冷/熱缺血后，在開始長時間灌注的起始階段，給予3個循環(huán)的"30秒灌注-30秒再缺血"缺血后處理； IPC-IPO組：在冷/熱缺血開始前，給予1個循環(huán)的"5分鐘缺血-5分鐘再灌注"缺血預(yù)處理，并且在結(jié)束冷/熱缺血后，在開始長時間灌注的起始階段，給予3個循環(huán)的"30

10、秒灌注-30秒再缺血"缺血后處理。 各組一半動物在再灌注后3小時后，采集樣本檢測血清AST、ALT水平，膽汁葡萄糖含量、GGT水平，肝臟組織學(xué)及超微結(jié)構(gòu)改變，采用雙抗體夾心ABC-ELISA法，檢測血清中腫瘤壞死因子α(TNF-α)，白介素-1β(IL-1β)含量；采用化學(xué)比色法測定肝組織中丙二醛(MDA)含量，黃嘌呤氧化酶法測定肝組織中超氧化物歧化酶(SOD)活性：采用免疫組化檢測檢測肝細胞Fas基因的表達；流式細胞技術(shù)檢測細