反義核苷酸靶向納米縮合體研究.pdf

1、授予單位代碼10459學(xué)號(hào)或申請(qǐng)?zhí)枺篞33壘!121密級(jí)：鄭州大學(xué)碩士學(xué)位論文論文題目：反義核苷酸靶向納米縮合體研究作者姓名：學(xué)科門(mén)類：專業(yè)名稱：導(dǎo)師姓名、職稱：宋旭藥學(xué)藥理學(xué)張振中教授二零零六年五月總之，本研究建立了一個(gè)制備DNA靶向縮合體的新方法。該方法可以在反義核營(yíng)酸聚賴氨酸縮合體表面包上一層靶向于腫瘤細(xì)胞的多肽。由于反義核苷酸包在靶向縮合體內(nèi)部，最外‘層多肽的功能基團(tuán)可以任意改變，因此這將為非病毒DNA遞送體系的相關(guān)研究提供一個(gè)

2、新的思路。第—部分：反義棱苷酸聚賴氨酸縮臺(tái)研究方法：1反義核苷酸一聚賴氨酸縮合體的制備采用均勻設(shè)計(jì)法考察DH值，反義核苷酸濃度，離子強(qiáng)度，正負(fù)電荷比(聚賴氨酸所帶的正電荷與反義核苷酸所帶的負(fù)電荷的比值)對(duì)反義核苷酸聚賴氨酸縮合體的粒徑和zeta電位的影響。其縮合體制備方法如下：取小同pH值的HEPEs緩沖液各06mL，依次加入氯化鈉溶液，反義核苷酸貯備液和聚賴氨酸貯備液。使最終溶液中pH值總As0N濃度正負(fù)電荷比，離子強(qiáng)度值達(dá)到實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)

3、值。其中離予強(qiáng)度以氯化鈉濃度代表，正／負(fù)電荷比是指賴氨酸殘基數(shù)與DNA分子中的脫氧核苷酸數(shù)之比。參照文獻(xiàn)，按每個(gè)賴氨酸殘基貢獻(xiàn)’個(gè)『F電荷，每個(gè)脫氧核苷酸貢獻(xiàn)一個(gè)負(fù)電荷，賴氨酸殘基和脫氧核苷酸的分子量分別按照209道爾頓和310道爾頓來(lái)計(jì)算。2縮合體粒徑的測(cè)量采用Nanozs90激光粒度分析儀測(cè)定粒徑，折射率設(shè)置為1590，吸收系數(shù)設(shè)置為0010，溫度設(shè)置為25℃，測(cè)量模式設(shè)置為自動(dòng)以數(shù)均分布(sizedistrib眥ionbynlll

4、】曲er)的第’‘個(gè)峰的平均值(peaklmean)為測(cè)定結(jié)果。測(cè)量在制備后5分鐘內(nèi)完成。各組縮合體的配制方法如上。每組縮合體均配制3份，每份測(cè)量一次，每組共測(cè)量三次，取其平均值作為測(cè)量結(jié)果。3縮合體zeta電位的測(cè)量采用Nano—zS90測(cè)定并組縮合體的zeta電位。介電常數(shù)設(shè)置為79，黏度系數(shù)設(shè)置為O8872，溫度設(shè)置為25℃，測(cè)量模式設(shè)置為自動(dòng)。測(cè)量在制備后5分鐘內(nèi)完成。各組縮合體的制備方法如上。每組縮合體均配制3份，每份測(cè)量一次