運(yùn)動(dòng)性骨關(guān)節(jié)損傷線粒體通路機(jī)制及干預(yù)初探.pdf

1、研究目的：通過(guò)觀察大鼠運(yùn)動(dòng)性骨關(guān)節(jié)損傷模型血清學(xué)改變及關(guān)節(jié)組織線粒體凋亡通路中相關(guān)細(xì)胞因子表達(dá)的影響。以布洛芬進(jìn)行陽(yáng)性對(duì)照，探討運(yùn)動(dòng)性骨關(guān)節(jié)損傷的可能分子機(jī)制及虎紋蜘蛛毒素-Ⅰ(HWTX-Ⅰ)抗凋亡干預(yù)效果，為運(yùn)動(dòng)性骨關(guān)節(jié)損傷發(fā)生和發(fā)展的分子機(jī)制提供新的理論和實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　 研究方法：5-6周齡健康雄性SD大鼠96只，隨機(jī)分為早期生理鹽水組(n=16)、早期HWTX-Ⅰ用藥組(n=16)、早期布洛芬用藥組(n=16)、晚期生理

2、鹽水組(n=16)、晚期HWTX-Ⅰ用藥組(n=16)、晚期布洛芬用藥組(n=16)，采用改良Hulth模型結(jié)合間歇性中低強(qiáng)度運(yùn)動(dòng)建立大鼠運(yùn)動(dòng)性骨關(guān)節(jié)損傷病理模型，采用本課題組建立的大鼠硬脊膜外腔置管手術(shù)方法，應(yīng)用光鏡觀察模型中運(yùn)動(dòng)性骨關(guān)節(jié)損傷膝關(guān)節(jié)軟骨形態(tài)學(xué)變化；應(yīng)用免疫組織化學(xué)法觀察膝關(guān)節(jié)軟骨中Bcl-2、Bax、Caspase-3、Caspase-9等線粒體凋亡通路相關(guān)因子蛋白表達(dá)水平；應(yīng)用分光光度法測(cè)定血清中SOD、CAT、GS

3、H-Px活力及NO含量。
　　 研究結(jié)果：
　　 (1)通過(guò)HE染色光鏡下觀察到早期生理鹽水組膝關(guān)節(jié)軟骨組織潮線消失，軟骨細(xì)胞排列紊亂，多量軟骨細(xì)胞固縮；早期布洛芬用藥組膝關(guān)節(jié)軟骨組織潮線欠整齊，軟骨細(xì)胞排列欠整齊，少量軟骨細(xì)胞固縮；早期HWTX-Ⅰ用藥組膝關(guān)節(jié)軟骨組織結(jié)構(gòu)接近正常組織。晚期生理鹽水組膝關(guān)節(jié)軟骨表面出現(xiàn)關(guān)節(jié)裂隙，潮線消失，軟骨細(xì)胞排列紊亂；晚期布洛芬用藥組膝關(guān)節(jié)軟骨組織潮線不齊，軟骨細(xì)胞排列不齊，可見(jiàn)軟骨

4、細(xì)胞可見(jiàn)少量細(xì)胞空泡；晚期HWTX-Ⅰ用藥組膝關(guān)節(jié)軟骨組織結(jié)構(gòu)接近正常，潮線較整齊，軟骨細(xì)胞排列較一致，可見(jiàn)少量軟骨細(xì)胞固縮。
　　 (2)應(yīng)用免疫組織化學(xué)染色法觀察膝關(guān)節(jié)軟骨中Bcl-2在HWTX-Ⅰ用藥組可見(jiàn)陽(yáng)性細(xì)胞表達(dá)率高(陽(yáng)性細(xì)胞為棕褐色)且染色深；布洛芬用藥組次之；生理鹽水組可見(jiàn)陽(yáng)性細(xì)胞表達(dá)，但其分布明顯較HWTX-Ⅰ用藥組、布洛芬用藥組分布稀疏，且染色較淺。膝關(guān)節(jié)軟骨中Bax、Caspase-3、Caspase-9在

5、生理鹽水組可見(jiàn)陽(yáng)性細(xì)胞表達(dá)率高(陽(yáng)性細(xì)胞為棕褐色)且染色深；布洛芬用藥組次之；HWTX-Ⅰ用藥組可見(jiàn)陽(yáng)性細(xì)胞表達(dá)，但其分布明顯較生理鹽水組、布洛芬用藥組分布稀疏，且染色較淺。
　　 (3)分光光度法測(cè)定血清中SOD、CAT、GSH-Px活力及NO含量，血清中SOD、GSH-Px活力以HWTX-Ⅰ用藥組最高，布洛芬用藥組、生理鹽水組隨之降低；血清中CAT活力以生理鹽水組最低；血清中NO以生理鹽水組最高，布洛芬用藥組、HWTX-Ⅰ用

6、藥組隨之降低。
　　 結(jié)論：
　　 (1)HWTX-Ⅰ硬脊膜外腔用藥可以上調(diào)線粒體通路中運(yùn)動(dòng)性骨關(guān)節(jié)損傷大鼠關(guān)節(jié)軟骨抗凋亡因子Bcl-2蛋白表達(dá)，下調(diào)凋亡因子Bax、Caspase-3、Caspase-9蛋白表達(dá)，對(duì)運(yùn)動(dòng)性骨關(guān)節(jié)損傷有明顯的抗凋亡作用。
　　 (2)HWTX-Ⅰ硬脊膜外腔用藥可以上調(diào)運(yùn)動(dòng)性骨關(guān)節(jié)損傷大鼠血清中SOD、CAT、GSH-Px活力，下調(diào)大鼠血清中NO含量，明顯減輕自由基對(duì)運(yùn)動(dòng)性骨關(guān)節(jié)損傷