大負荷運動誘導(dǎo)大鼠骨骼肌線粒體自噬的機制及針刺干預(yù)研究.pdf

1、目的：觀察一次大負荷運動對大鼠骨骼肌線粒體結(jié)構(gòu)和功能的影響，分析線粒體自噬蛋白及相關(guān)蛋白的變化，探討大負荷運動誘導(dǎo)骨骼肌線粒體自噬的分子機制；觀察針刺對大負荷運動后骨骼肌線粒體的影響，并闡明其作用機理。
　　方法：將雄性SD大鼠作為研究對象。研究一和研究二分為對照組（C）和運動組（E），E組進行一次大負荷下坡跑；研究三分為安靜對照組（C）、單純運動組（E）、單純針刺組（A）和運動針刺組（EA），E和EA組進行下坡跑運動，A組和EA

2、組施加針刺處理。各組又按時相點劃分為0h、12h、24h、48h和72h組，分別于對應(yīng)時間點分離大鼠比目魚肌進行檢測。使用透射電鏡觀察骨骼肌線粒體超微結(jié)構(gòu)變化；采用ELISA方法測定線粒體定量酶CS的含量以及線粒體呼吸鏈復(fù)合體Ⅱ、Ⅳ的活性變化；應(yīng)用Western Blot方法檢測骨骼肌COXⅠ、PINK1和線粒體中Parkin、LC3的蛋白表達；利用免疫熒光雙標技術(shù)觀測Parkin、Ub、p62、LC3分別與線粒體的共定位及量。

3、　　結(jié)果：（1）一次大負荷運動后比目魚肌線粒體出現(xiàn)明顯腫脹、肌膜下積聚等超微結(jié)構(gòu)異常變化，且伴有大量不同成熟階段的自噬體形成，CS的含量減少，呼吸鏈復(fù)合體Ⅱ、Ⅳ活性以及COXⅠ蛋白表達出現(xiàn)一過性的下調(diào)。（2）一次大負荷運動后線粒體自噬蛋白PINK1、Parkin以及自噬相關(guān)蛋白Ub、p62、LC3均出現(xiàn)一過性的表達升高，免疫熒光結(jié)果和蛋白表達結(jié)果一致。（3）運動后針刺能明顯改善線粒體超微結(jié)構(gòu)的病理學改變，有自噬溶酶體的出現(xiàn)，抑制CS的含

4、量減少，上調(diào)呼吸鏈復(fù)合體Ⅱ、Ⅳ活性以及COXⅠ蛋白表達，下調(diào)PINK1、Parkin、Ub、p62、LC3在線粒體上的表達，免疫熒光結(jié)果和蛋白表達結(jié)果一致。
　　結(jié)論：（1）一次大負荷運動可導(dǎo)致骨骼肌線粒體結(jié)構(gòu)和功能受損，有大量自噬體形成，可能誘導(dǎo)了線粒體自噬的發(fā)生。（2）一次大負荷運動激活PINK1/Parkin通路，進而使Ub和p62在線粒體上表達最終促進LC3與線粒體結(jié)合，三者協(xié)同調(diào)控線粒體自噬的發(fā)生。（3）運動后針刺使線粒