5-Aza-CdR對肝癌細胞HepG2增殖及PI3KC3基因甲基化的影響.pdf

1、目的：
　　觀察甲基化特異性轉(zhuǎn)移酶抑制劑5-氮雜-2'脫氧胞苷(5-Aza-CdR)對肝癌細胞HepG2增殖及PI3KC3基因甲基化和表達的影響，探討 PI3KC3基因在肝癌細胞中失活的主要機制及通過改變肝癌細胞PI3KC3基因甲基化來治療肝癌的新思路。
　　方法：
　　采用不同濃度的5-Aza-CdR（0μmol/L、1μmol/L、5μmol/L、10μmol/L和20μmol/L）分別處理HepG2細胞24h、4

2、8h和72 h后，采用MTT（四唑鹽比色法）法檢測5-Aza-CdR處理對肝癌細胞株HepG2增殖的影響；采用qRT-PCR及Western blotting方法檢測PI3KC3基因mRNA及蛋白表達；甲基化特異性PCR來檢測陰性對照組（未經(jīng)5-Aza-CdR處理）和經(jīng)20μmol/L5-Aza-CdR處理72h的HepG2細胞中PI3KC3基因甲基化的變化情況。
　　結(jié)果：
　　不同濃度的5-Aza-CdR（0μmol/L

3、、1μmol/L、5μmol/L、10μmol/L和20μmol/L）分別處理HepG2細胞24h、48h和72 h后，MTT檢測發(fā)現(xiàn)5-Aza-CdR對HepG2的體外增殖具有抑制作用，呈現(xiàn)時間及劑量依賴性（P<0.05），差異具有統(tǒng)計學意義；不同濃度的5-Aza-CdR（0μmol/L、1μmol/L、5μmol/L、10μmol/L和20μmol/L）分別處理HepG2細胞24h、48h和72 h后，qRT-PCR方法檢測發(fā)現(xiàn)5-

4、Aza-CdR對肝癌細胞株HepG2中PI3KC3mRNA的上調(diào)呈明顯的時間、劑量依賴性（P<0.05），差異均具有統(tǒng)計學意義；Western blotting方法檢測發(fā)現(xiàn)5-Aza-CdR對HepG2細胞中PI3KC3蛋白的上調(diào)呈時間、劑量依賴性（P<0.05），差異均具有統(tǒng)計學意義；MSP法測得陰性對照組（未經(jīng)5-Aza-CdR處理）的肝癌細胞HepG2中PI3KC3基因甲基化與非甲基化共存，并且甲基化程度均明顯高于非甲基化；加用去