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文檔簡介
1、目的:研究去甲基化藥物5-氮雜-2’-脫氧胞苷(5-aza-2’-deoxycytidine,5-Aza-CdR)對人胰腺癌細胞系MiaPaca2的生長及Runt相關轉錄因子3(runt-relatedtranscriptionfactor3,RUNX3)基因甲基化和表達的影響,探討RUNX3基因在胰腺癌細胞中失活的主要機制,進一步探索通過改變胰腺癌細胞RUNX3基因甲基化來治療胰腺癌的新思路。
方法:(1)體外傳代培養(yǎng)Mia
2、Paca2胰腺癌細胞,經不同濃度5-Aza-CdR(2.5μmol/L、5μmol/L、10μmol/L、20μmol/L)處理24h~96h后,倒置顯微鏡下觀察MiaPaca2細胞形態(tài)學變化;MTT法檢測5-Aza-CdR對MiaPaca2細胞生長增殖的影響。(2)收集未經藥物處理和經10μmol/L5-Aza-CdR處理72h的MiaPaca2細胞,提取兩組細胞基因組DNA,甲基化特異性聚合酶鏈反應(MSP)檢測RUNX3基因甲基化
3、的變化情況。(3)收集未經藥物處理和經5μmol/L及10μmol/L5-Aza-CdR處理72h的MiaPaca2細胞,提取各組細胞總RNA,采用反轉錄聚合酶鏈反應(RT-PCR)半定量檢測RUNX3mRNA表達的變化。
結果:(1)經5-Aza-CdR處理后,MiaPaca2細胞的生長受到抑制,且隨著藥物濃度的增加及作用時間的延長其抑制作用越明顯。(2)未經藥物處理的MiaPaca2細胞RUNX3基因呈完全甲基化狀態(tài),而經
4、10μmol/L5-Aza-CdR處理72h后,RUNX3基因表現為不完全甲基化狀態(tài),該基因甲基化得到部分逆轉。(3)未經藥物處理的MiaPaca2細胞未能檢測到RUNX3基因mRNA表達,而經5μmol/L及10μmol/L5-Aza-CdR處理72h后,RUNX3mRNA可恢復表達,且表達水平與用藥劑量存在一定量效關系。
結論:RUNX3基因甲基化狀態(tài)與胰腺癌的發(fā)生發(fā)展有密切關系,異常甲基化可能是引起RUNX3基因表達缺失
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