5-AzA-CdR對胰腺癌BxPC-3細胞miR-148a表達、CpG島甲基化狀態(tài)及細胞增殖的影響.pdf

1、目的：探討去甲基化劑5-氮雜脫氧胞苷(5-Aza-CdR)對胰腺癌BxPC-3細胞miR-148a表達水平、CpG島甲基化狀態(tài)及細胞增殖的影響。
　　方法：DMEM培養(yǎng)基常規(guī)培養(yǎng)胰腺癌BxPC-3細胞，實驗分2組，實驗組培養(yǎng)基中加入終濃度5μmol/L的5-Aza-CdR、對照組加入等體積PBS培養(yǎng)，培養(yǎng)72 h時收集細胞。實時定量熒光PCR(RT-qPCR)法檢測細胞miR-148a表達水平;應(yīng)用甲基化特異性PCR(MSP)法檢

2、測細胞miR-148a基因啟動子區(qū)CpG島甲基化狀態(tài);四甲基偶氮唑鹽比色分析法(MTT)檢測細胞體外增殖活力。
　　結(jié)果：⑴實驗組miR-148a相對表達量為對照組2.93±0.11倍，與對照組相比實驗組miR-148a表達水平明顯上調(diào)(P＜0.01);⑵實驗組miR-148a基因啟動子CpG島甲基化陰性，而對照組miR-148a基因啟動子CpG島甲基化陽性;⑶實驗組細胞24 h、48 h、72 h、96 h及120 h時間點體外

3、增殖活力均低子對照組，生長抑制率分別為2.36％、5.55％、15.63％、16.63％和18.90％，與對照組相比，實驗組BxPC-3細胞體外增殖活力顯著減慢(P＜0.05)。
　　結(jié)論：去甲基化劑5-Aza-CdR可致胰腺癌BxPC-3細胞miR-148a基因啟動子區(qū)CpG島去甲基化，從而顯著上調(diào)miR-148a表達水平，并抑制胰腺癌BxPC-3細胞生長。提示miR-148a在胰腺癌中的表達受DNA甲基化調(diào)控，并起到“抑癌基因