5-Aza-CdR對人肝癌SMMC-7721細(xì)胞增殖及其對DNMT3B表達(dá)的影響.pdf

1、目的：觀察5-脫氧雜氮胞苷(5-aza-CdR)對人肝癌細(xì)胞SMMC7721增殖的抑制作用及其對甲基化轉(zhuǎn)移酶3B(DNA methyltransferase3B,DNMT3B)表達(dá)的影響，以探討DNA甲基化在原發(fā)性肝癌中凋亡的作用機制。
　　方法：體外培養(yǎng)人肝癌細(xì)胞 SMMC7721，加入不同濃度的甲基轉(zhuǎn)移酶抑制劑5-aza-CdR（1μm/L、5μm/L、10μm/L和20μm/L）孵育24 h、48 h和72 h，采用相差顯微

2、鏡動態(tài)觀察肝癌細(xì)胞形態(tài)學(xué)改變；采用MTT比色法測肝癌細(xì)胞抑制率；流式細(xì)胞儀（FCM）檢測肝癌細(xì)胞周期影響；RT-PCR檢測5-aza-CdR對DNMT3B mRNA的表達(dá)水平的影響；Western blot檢測DNMT3B的蛋白表達(dá)。
　　結(jié)果：
　　1、MTT法檢測結(jié)果可見不同濃度的5-aza-CdR可顯著抑制SMMC7721細(xì)胞增殖，呈現(xiàn)一定量效關(guān)系，且該抑制作用隨孵育時間延長逐漸增強。（P<0.05）。
　　2、

3、流式細(xì)胞儀（FCM）檢測結(jié)果顯示5-aza-CdR對SMMC7721細(xì)胞S期阻滯作用呈時間依賴性。（P<0.05）
　　3、Real Time PCR法檢測顯示1μm/L，5μm/L，10μm/L，20μm/L的5-aza-CdR處理肝癌細(xì)胞株SMMC-772124h，48h，72h后DNMT3BmRNA表達(dá)水平逐漸降低；且同一濃度下伴隨作用時間的延長，DNMT3B mRNA表達(dá)水平降低。說明隨著5-aza-CdR濃度的升高和作用

4、時間的延長DNMT3B mRNA表達(dá)水平降低并在一定程度上呈時間和劑量依賴性。（P<0.05）
　　4、Western blot法檢測提示與對照相比5-aza-CdR處理肝癌細(xì)胞株SMMC-772124h后，DNMT3B蛋白表達(dá)量即開始減少，處理48h、72h也同樣有此趨勢，并且各時間段中隨著5-aza-CdR的濃度增加DNMT3B蛋白表達(dá)量逐漸減少。說明DNA甲基化酶的特異性抑制劑5-aza-CdR能抑制肝癌細(xì)胞株SMMC-77