5-Aza-CdR通過調控FXR基因甲基化水平抑制apo(a)表達.pdf

1、目的：探討5-氮雜-2’-脫氧胞苷(5-aza-2’-deoxycytidine,5-Aza-CdR)的DNA去甲基化作用對HepG2細胞載脂蛋白(a)[apolipoprotein(a),apo(a)]表達的影響，并探討其作用機制。
　　方法：選取apo(a)高表達細胞株HepG2細胞為研究對象：①MTT法測定HepG2經不同濃度(0、10、20、40、80μmol/L)、不同時間（12、24、48、72、96hr）的5-Aza

2、-CdR處理后細胞相對存活率，選取合適藥物作用濃度及作用時間范圍；②通過Western blot檢測5-Aza-CdR不同濃度組及處理時間組HepG2細胞apo(a)、法尼酯X受體(famesoid X receptor,FXR)的表達水平，用RT-PCR檢測apo(a)、FXR的mRNA水平；③采用亞硫酸測序PCR（Bisulfite Sequencing PCR,BSP）檢測FXR基因啟動子在不同5-Aza-CR濃度組的甲基化水平。

3、
　　結果：①MTT結果顯示：與對照組相比，10μmol/L、20μmol/L、40μmol/L組在12hr、24hr、48hr、72hr各組間細胞存活率無統計學差異（P＞0.05），而在20μmol/L96hr組、40μmol/L96hr組、80μmol/L24hr組、80μmol/L48hr組、80μmol/L72hr組以及80μmol/L96hr組HepG2細胞存活率存在明顯統計學差異（P＜0.05），選取0-40μmol/

4、L為5-Aza-CdR的安全濃度范圍，0-72hr為合適作用時間窗；②Western blot結果顯示：與對照組相比，5-Aza-CdR呈劑量和時間依賴性上調FXR蛋白、下調apo(a)蛋白表達表達，其中以40μmol/L濃度組以及72hr時間組差異最為明顯（P＜0.05）；③RT-PCR結果顯示：與對照組相比，5-Aza-CdR呈劑量和時間依賴性上調FXRmRNA、下調apo(a)mRNA表達，其中以40μmol/L濃度組以及72hr

5、時間組差異最為明顯（P＜0.05）；④BSP結果顯示：隨著5-Aza-CdR濃度的遞增，FXR基因啟動子甲基化水平呈下降趨勢，其中對照組FXR基因啟動子甲基化率為58.3％（7/12），而40μmol/L組FXR基因啟動子甲基化率僅為8.3%（1/12）。
　　結論：1、5-Aza-CdR劑量及時間依賴性地抑制HepG2細胞apo(a)表達；
　　2、5-Aza-CdR通過DNA去甲基化作用促進 FXR表達,從而下調 apo