豬G6PC、LCAT和Nurr1基因的克隆、多態(tài)性分析及組織表達譜研究.pdf

1、分子標記輔助選擇和滲入等分子育種技術與常規(guī)育種方法相結(jié)合極大地加速了豬遺傳改良的進程，分子標記輔助選擇的基礎是尋找與重要經(jīng)濟性狀相關的主效基因或分子標記。因此，本研究通過候選基因的方法，并結(jié)合豬的EST信息和比較基因組的策略，分離鑒定了豬G6PC基因、LCAT基因和Nurr1基因，并對基因與部分性狀進行了關聯(lián)分析和結(jié)構功能域的預測，取得了如下結(jié)果： 1.葡萄糖6磷酸酶催化亞基(glucose-6-phosphatase，cata

2、lyticsubunit，G6PC)： (1)獲得了大白豬、梅山豬兩個豬種G6PC基因編碼區(qū)序列和部分基因組序列，并將梅山豬序列提交到GenBank中，獲得登錄號為EU717834。 (2)利用CLUSTALW、DNAStar、Prosite等軟件對所編碼蛋白質(zhì)的結(jié)構、功能等特征進行了預測和分析，并構建了系統(tǒng)進化樹。 (3)序列比對發(fā)現(xiàn)第5外顯子657bp處存在大白C/梅山T的堿基突變，引起RsaI酶切(CT↓A

3、C)多態(tài)，建立了PCR-RsaI-RFLP分型方法。同時在大白×梅山F2代299頭的資源家系中與豬胴體性狀和肉質(zhì)性狀進行了關聯(lián)分析，發(fā)現(xiàn)G6PC基因型與皮率、屠宰率、肩部膘厚、背最長肌pH、背最長肌失水率、背最長肌系水力、背最長肌肌肉色值相關顯著(p<0.05)。BB基因型與AA基因型相比具有更高的瘦肉率以及更低的肥肉率和背膘厚。 (4)序列比對發(fā)現(xiàn)第3內(nèi)含子460bp處存在大白A/梅山C的堿基突變，引起HpaII酶切(C↓CG

4、G)多態(tài)，建立了PCR-HpaII-RFLP分型方法。同時在大白×梅山F2代257頭的資源家系中與豬胴體性狀和肉質(zhì)性狀進行了關聯(lián)分析，發(fā)現(xiàn)G6PC基因型與骨率、肩部膘厚、6-7腰椎間膘厚、眼肌寬、背最長肌含水量、股二頭肌肌肉色值相關顯著(p<0.05)，與眼肌高、背最長肌肌肉色值、背最長肌肌內(nèi)脂肪含量相關極顯著(p<0.01)。 (5)利用半定量RT-PCR的方法在豬心、肝、脾、肺、腎、胃、小腸、子宮、肌肉、脂肪等10個不同組織

5、中研究了該基因的表達情況，分析發(fā)現(xiàn)，該基因在肝臟和腎臟中表達量最高。 2.卵磷脂膽固醇?；D(zhuǎn)移酶(lecithincholesterolacyltransferase，LCAT)： (1)獲得了大白豬、梅山豬兩個豬種LCAT基因編碼區(qū)序列和部分基因組序列，并將梅山豬序列提交到GenBank中，獲得登錄號為EU717835、EU717836。 (2)利用CLUSTALW、DNAStar、Prosite等軟件對所編碼

6、蛋白質(zhì)的結(jié)構、功能等特征進行了預測和分析，并構建了系統(tǒng)進化樹。 (3)序列比對發(fā)現(xiàn)第1內(nèi)含子266bp處存在大白C/梅山G的堿基突變，引起PVuII酶切(CAG↓CTG)多態(tài)，建立了PCR-PvuII-RFLP分型方法。同時在大白×梅山F2代304頭的資源家系中與豬胴體性狀和肉質(zhì)性狀進行了關聯(lián)分析，LCAT基因型與胴體長，骨率相關顯著(p<0.05)。 (4)利用半定量RT-PCR的方法在豬心、肝、脾、肺、腎、胃、小腸、

7、子宮、肌肉、脂肪等10個不同組織中研究了該基因的表達情況，分析發(fā)現(xiàn)，該基因在肝、脾、肺、腎、腸、子宮中表達量較高，在心、肌肉、脂肪組織中表達弱些、在胃中表達最弱。 3.核受體相關因子1(nuclearreceptor-relatedfactor1，Nurr1)： (1)獲得了大白豬、梅山豬兩個豬種Nurr1基因編碼區(qū)序列和部分基因組序列，并將大白豬序列提交到GenBank中，獲得登錄號為EU717837、EU717838

8、。 (2)利用CLUSTALW、DNAStar、Prosite等軟件對所編碼蛋白質(zhì)的結(jié)構、功能等特征進行了預測和分析，并構建了系統(tǒng)進化樹。 (3)序列比對發(fā)現(xiàn)，該基因非常保守，沒有發(fā)現(xiàn)突變位點。 (4)利用半定量RT-PCR的方法在豬在豬心、肝、脾、肺、腎、胃、小腸、子宮、肌肉、脂肪等10個不同組織中研究了該基因的表達情況，分析發(fā)現(xiàn)Nurr1基因在脾、肺、腎中表達量較高，在心、肝、肌肉組織中表達弱，在胃、小腸、子