豬IGFBP6和CYR61基因片段的克隆、定位、多態(tài)及組織表達(dá)譜研究.pdf

1、IGFBP6和CYR61是IGFBP超家族的成員，能與胰島素樣生長(zhǎng)因子（IGFs）結(jié)合，調(diào)節(jié)IGFs與其受體（IGFR）的結(jié)合能力，從而調(diào)節(jié)機(jī)體生長(zhǎng)發(fā)育和代謝。本課題將其作為影響豬生長(zhǎng)發(fā)育的候選基因進(jìn)行研究，通過對(duì)其基因片段克隆、染色體定位、組織表達(dá)譜分析、原核表達(dá)、多態(tài)位點(diǎn)檢測(cè)及其與相關(guān)性狀的關(guān)聯(lián)分析，為進(jìn)一步研究該基因?qū)ωi生長(zhǎng)發(fā)育和脂肪代謝的作用機(jī)制打下基礎(chǔ)，并為豬標(biāo)記輔助選擇提供候選基因。主要研究結(jié)果如下： 1．依據(jù)人cD

2、NA信息，應(yīng)用生物信息學(xué)及比較基因組學(xué)策略，以獲得的豬EST重疊群來(lái)設(shè)計(jì)豬特異引物，克隆出豬IGFBP6基因片段和CYR61基因片段，并獲得豬IGFBP6基因cDNA編碼區(qū)全長(zhǎng)序列。 2．利用體細(xì)胞雜種板和輻射雜種板分別對(duì)豬IGFBP6基因和CYR61基因進(jìn)行染色體區(qū)域定位，將PCR分型數(shù)據(jù)提交到在線數(shù)據(jù)分析軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。結(jié)果表明，IGFBP6基因定位于豬5p11-p15（與SW439緊密連鎖，LOD＝10.14），CYR6

3、1基因定位于豬4q21-q24（與SW1461緊密連鎖，LOD＝5.43）。 3．利用RT-PCR法，檢測(cè)了成年長(zhǎng)白母豬的心、肝、脾、肺、腎、肌肉、脂肪、胃和小腸組織，以及長(zhǎng)大小公豬的心、肝、脾、肺、腎和肌肉組織中豬IGFBP6基因和CYR61基因的組織表達(dá)譜。結(jié)果表明，IGFBP6基因在上述組織中均有表達(dá)，在母豬脂肪組織和小豬心臟組織中表達(dá)量相對(duì)較高，CYR61基因在小豬心臟組織中表達(dá)最高。 4．應(yīng)用測(cè)序和PCR-RF

4、LP方法，發(fā)現(xiàn)豬IGFBP6基因第4外顯子Taa I-RFLP（T-C）存在多態(tài)位點(diǎn)，分析了不同群體中該堿基突變位點(diǎn)的多態(tài)性，計(jì)算了該位點(diǎn)在10個(gè)豬品種中的基因型和基因頻率，比較了各基因型在不同豬群的分布差異。研究發(fā)現(xiàn)，該位點(diǎn)在國(guó)內(nèi)外豬品種中具有豐富多態(tài)性。 5．檢測(cè)了通城豬、長(zhǎng)白豬、大白豬、大長(zhǎng)通豬和長(zhǎng)大通豬（華中農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物分子生物學(xué)與育種實(shí)驗(yàn)室與通城縣畜牧局共同組建的試驗(yàn)群體）IGFBP6基因第4外顯子Taa I-RFLP