結(jié)核桿菌分泌蛋白MPT64在結(jié)核病診斷中的應(yīng)用研究.pdf

1、目的：MPT64是結(jié)核分枝桿菌（mycobacterium tuberculosis，MTB）早期分泌蛋白的主要成份，本研究則探討應(yīng)用MPT64作為快速檢測(cè)結(jié)核分枝桿菌生長指示的可能性，以期建立一種準(zhǔn)確、快速、簡(jiǎn)便、易于普及開展的結(jié)核分枝桿菌生長檢測(cè)方法。并對(duì)應(yīng)用MPT64檢測(cè)鑒定結(jié)核分枝桿菌復(fù)合群（Mycobacterium tuberculosis complex，MTC）進(jìn)行了方法學(xué)評(píng)價(jià)。
　　 方法：
　　 1、

2、應(yīng)用MPT64為靶標(biāo)快速檢測(cè)
　　 結(jié)核分枝桿菌生長對(duì)4株結(jié)核分枝桿菌1mg/ml純培養(yǎng)物菌液進(jìn)行10倍倍比稀釋，得到32例菌懸液，將其接種于BacT/Alert 3D全自動(dòng)分枝桿菌培養(yǎng)系統(tǒng)的培養(yǎng)基中進(jìn)行培養(yǎng)；選擇32例臨床送檢樣本（涂片抗酸染色陽性）以及64例臨床隨機(jī)送檢樣本接種于BacT/Alert 3D全自動(dòng)分枝桿菌培養(yǎng)系統(tǒng)的培養(yǎng)基中進(jìn)行培養(yǎng)，培養(yǎng)陽性的樣本進(jìn)行菌種鑒定。同時(shí)，對(duì)菌懸液進(jìn)行MPT64檢測(cè)，當(dāng)高濃度MPT64

3、檢測(cè)陽性時(shí)，即對(duì)下一濃度每天進(jìn)行1次MPT64檢測(cè)；對(duì)抗酸涂片染色陽性樣本的培養(yǎng)液每天進(jìn)行1次MPT64檢測(cè)，陰性者檢測(cè)至培養(yǎng)陽性出現(xiàn)或至培養(yǎng)42天；對(duì)臨床隨機(jī)送檢樣本的培養(yǎng)液則每周定時(shí)進(jìn)行1次MPT64檢測(cè)，陰性者檢測(cè)至培養(yǎng)6周。
　　 2、應(yīng)用MPT64檢測(cè)鑒定
　　 結(jié)核分枝桿菌復(fù)合群對(duì)23株參考菌株，同時(shí)接種于BacT/ALERT 3D系統(tǒng)的液體培養(yǎng)液和改良羅氏固體培養(yǎng)基中，對(duì)這兩種樣本都采用結(jié)核分枝桿菌膠體金法

4、診斷試劑進(jìn)行MPT64分泌蛋白檢測(cè)。而對(duì)133株臨床送檢分離菌株，BacT/ALERT 3D系統(tǒng)分離培養(yǎng)的菌株直接應(yīng)用其液體培養(yǎng)基上清液進(jìn)行檢測(cè)，對(duì)于改良羅氏固體培養(yǎng)基分離培養(yǎng)的菌株，則應(yīng)用生理鹽水將細(xì)菌振搖混勻制備成濁度為1麥?zhǔn)蠁挝坏纳睇}水菌懸液，室溫靜置2h后取上清液進(jìn)行檢測(cè)，而后與菌種鑒定結(jié)果相比較。
　　 結(jié)果：
　　 1、（1）分枝桿菌純培養(yǎng)物菌液稀釋試驗(yàn)顯示：應(yīng)用MPT64作為快速檢測(cè)結(jié)核分枝桿菌生長指示的

5、最小菌量為10-7～10-6mg/ml，BacT/ALERT 3D儀器系統(tǒng)培養(yǎng)法為10-6～10-5mg/ml。（2）32例涂片抗酸染色陽性樣本中有31例BacT/ALERT 3D儀器培養(yǎng)陽性，檢出時(shí)間為6～30天，平均13.7天。其中菌種鑒定為結(jié)核分枝桿菌的29例樣本中有28例MPT64檢測(cè)陽性，檢出時(shí)間為3～16天，平均7.8天。其余2例菌種鑒定為非結(jié)核分枝桿菌的培養(yǎng)物MPT64檢測(cè)陰性。（3）64例臨床隨機(jī)送檢樣本中15例BacT

6、/ALERT 3D儀器培養(yǎng)陽性，檢出時(shí)間為7～39天，平均19.2天，其中菌種鑒定為結(jié)核分枝桿菌的13例樣本MPT64檢測(cè)全部陽性，MPT64檢測(cè)陽性結(jié)果均在4周內(nèi)呈現(xiàn)；在49例培養(yǎng)陰性樣本中有2例MPT64檢測(cè)陽性，分別在培養(yǎng)3、4周末檢出，增補(bǔ)結(jié)核分枝桿菌DNA擴(kuò)增實(shí)驗(yàn)，結(jié)果陽性；其余47例MPT64檢測(cè)陰性培養(yǎng)樣本和2例菌種鑒定為非結(jié)核分枝桿菌培養(yǎng)樣本培養(yǎng)物在培養(yǎng)6周末時(shí)MPT64檢測(cè)均為陰性。(4)以BacT/ALERT 3D快

7、速培養(yǎng)系統(tǒng)方法為參照，應(yīng)用MPT64檢測(cè)指示結(jié)核分枝桿菌生長方法的敏感性為97.61％、特異性為96.29％。
　　 2、對(duì)23株分枝桿菌參考菌株、133株臨床分離菌株進(jìn)行了MPT64檢測(cè)。（1）對(duì)于參考菌株的兩種樣本，MPT64檢測(cè)結(jié)果均為：結(jié)核分枝桿菌、牛分枝桿菌、田鼠分枝桿菌菌株陽性，其它20株非結(jié)核分枝桿菌為陰性。分群鑒定準(zhǔn)確度為100％。（2）在BacT/ALERT 3D系統(tǒng)分離培養(yǎng)的56株臨床菌株中，27株鑒定為結(jié)核

8、分枝桿菌，其中25株MPT64檢測(cè)陽性；29株鑒定為非結(jié)核分枝桿菌，其中27株MPT64檢測(cè)陰性。分群鑒定準(zhǔn)確度為92.85％。（3）在改良羅氏培養(yǎng)基分離培養(yǎng)的77株臨床菌株中，58株鑒定為結(jié)核分枝桿菌，其中55株MPT64檢測(cè)陽性；19株鑒定為非結(jié)核分枝桿菌，MPT64檢測(cè)全部陰性。分群鑒定準(zhǔn)確度為96.11％。（4）對(duì)于所有研究樣本，應(yīng)用MPT64分泌蛋白檢測(cè)鑒定結(jié)核分枝桿菌復(fù)合群的敏感度、特異度與準(zhǔn)確度分別為94.31％、97.0