TIFlγ基因啟動子區(qū)域突變和甲基化與非小細胞肺癌發(fā)生關系的研究.pdf

1、背景與目的:TIF1γ(Transcription intermediary factor1 gamma)屬于轉(zhuǎn)錄中介因子1家族的成員，可干擾TGF-β/Smad信號通路，抑制TGF-β介導的信號傳導，且TIF1γ在多種腫瘤細胞的表達減弱和缺失表明TIF1γ在癌癥的發(fā)生發(fā)展過程中起到抑癌的作用。本研究旨在探索TIF1γ在non-small cell lung cancer(NSCLC)與組織中的表達差異以確定TIF1γ與肺癌發(fā)生關系以及

2、肺癌細胞中TIF1γ表達調(diào)控的潛在機制。
　　方法:選取13例NSCLC患者癌組織以及對應的癌旁組織樣本，培養(yǎng)正常支氣管上皮細胞HBE和NSCLC細胞株:A549和95C。運用Real-time PCR和westernblot檢測細胞與組織中TIF1γ基因的表達，并用ImageJ灰度掃描軟件計算TIF1γ的相對表達量。通過DNA測序的方法檢測TIF1γ基因啟動子區(qū)域突變情況，并采用Bisulfite-sequencing PCR(

3、BSP)克隆測序方法檢測TIF1γ基因啟動子區(qū)域甲基化情況。
　　結果:相對于HBE，TIF1γ mRNA和蛋白在A549和95C中顯著下調(diào)(P＜0.05），對13對組織樣本中的TIF1γ mRNA的表達量檢測結果發(fā)現(xiàn)在9對(69.2％)癌旁組織樣本里TIF1γ mRNA的表達量高于癌組織樣本(P＜0.05)。啟動子活性分析結果表明TIF1γ基因核心啟動子位于啟動子-282--30區(qū)段。突變檢測包含核心啟動子的TIF1γ基因-28

4、7--5區(qū)段發(fā)現(xiàn)在各細胞株中該區(qū)段沒有突變發(fā)生。經(jīng)BSP克隆測序方法分析發(fā)現(xiàn)在TIF1γ基因啟動子-287--5區(qū)域里存在5個可被甲基化的CpG位點（-214、-128、-124、-65和-55）。但這些CpG位點的甲基化頻率在NSCLC細胞株中相比HBE沒有顯著差異。
　　結論:TIF1γ在NSCLC的發(fā)生中可能起抑癌的作用，TIF1γ基因核心啟動子位于啟動子-282--30區(qū)段，TIF1γ基因啟動子區(qū)域-287--5在正常細胞