腎母細(xì)胞瘤RASSFIA基因啟動子區(qū)甲基化研究.pdf

1、中文摘要前言RASSFIA基因是近年發(fā)現(xiàn)的腫瘤抑制基因(GeneTSG)o脅究表明，RASSFIA蛋白參與RasTumorSuppressor途徑信號傳導(dǎo)、DNA損傷修復(fù)和誘導(dǎo)凋亡，從而被確定為腫瘤抑制基因。其啟動子區(qū)高甲基化導(dǎo)致基因滅活，與許多腫瘤，如肺癌、胃癌、乳腺癌、鼻咽癌、神經(jīng)母細(xì)胞瘤、腎癌和前列腺癌等發(fā)生有關(guān)。由于啟動子區(qū)高甲基化，基因轉(zhuǎn)錄受到抑制抑癌作用不能發(fā)揮，導(dǎo)致腫瘤發(fā)生，相應(yīng)蛋白減少或缺失，致使其。這是廣大學(xué)者公認(rèn)的觀

2、點，甲基化也成為近期研究的熱點擴Yo于目前國內(nèi)外尚未見到腎母細(xì)胞瘤RASSFIA基因啟動子區(qū)甲基化報道，我們采用定點檢測基因甲基化方法，檢測9例腎母細(xì)胞瘤，結(jié)果報道如下。方法收集2001年我院手術(shù)切除腎母細(xì)胞瘤及相應(yīng)瘤旁殘留腎組織9例，70℃冰箱中保存?zhèn)溆?。用酚氯仿法提取DNA。紫外分光光度儀檢測DNA濃度，選用OD2600D280值大于1.75的樣品。采取強堿變性、亞硫酸氫鈉對苯二酚法處理DNA后，用層析柱過柱除鹽。巢式PCR擴增RA

3、SSFIA基因啟動子區(qū)DNA片段。應(yīng)用一對半引物，引物序列如下:ML730:5ACCCTCTCCTCTAACACAATAAAACTAACC3ML561:5CCCCACAATCCCTACACCCAAAT3MU379:5G1111GGTAGTTTAATGAGTITAGG11“11113o第一次用引物MU379ML730PCR擴增經(jīng)亞硫酸氫鈉處理基因不能轉(zhuǎn)錄，無蛋白生成，不能抑制腫瘤進展。因而有必要研究RASSFIA基因甲基化情況。RASSF

4、IA基因是一個抑癌基因。長期以來，人們發(fā)現(xiàn)，肺癌、鼻咽癌組織及相應(yīng)腫瘤細(xì)胞系等多種腫瘤，都在3P區(qū)域有高頻率雜合性缺失、基因片段敲除等異常，并推測在3滬一3尸.4區(qū)間可能存在抑癌基因。在3廣’區(qū)定位克隆了包括RASSFIA在內(nèi)的19個腫瘤抑制基因候選基因，確定在3尹’的一個Ras效應(yīng)基因家族RASSF1，其有3個轉(zhuǎn)錄版本一ABC.RASSFIA基因cDNA全長1873bp，編碼340個氨基酸的蛋白質(zhì)。推測其功能:1.參與細(xì)胞信號傳導(dǎo)，激

5、活Ra。途徑。2.與DNA損傷修復(fù)蛋白一XPA相互作用，參與DNA損傷修復(fù)。3，作為細(xì)胞生長負(fù)向調(diào)控子。4.介導(dǎo)凋亡。Ras基因是一個原癌基因，但其效應(yīng)蛋白家族RASSFI，卻有抑癌功能。這是因為，Ras途徑被激活，促進細(xì)胞生長和轉(zhuǎn)型的同時，Ras蛋白也作用于Ras效應(yīng)蛋白來誘導(dǎo)生長抑制。并提出了一個假說:驅(qū)動細(xì)胞死亡及增殖的信號傳導(dǎo)路緊密伴隨著保護并抑制原癌基因的傳導(dǎo)路。這個假說打破了原癌基因、癌基因和抑癌基因的絕對界限。理解Ras基

6、因是如何打破腫瘤的細(xì)胞死亡平衡的，對于明確人類腫瘤發(fā)生中Ras作用是重要的。目前對RASSFIA啟動子區(qū)甲基化檢測發(fā)現(xiàn)，2例小細(xì)胞肺癌全部甲基化19例鱗狀細(xì)胞肺癌中7例全部甲基化，余無甲基化另外，在32個癌細(xì)胞系中，甲基化程度較高而正常組織無甲基化。還有學(xué)者研究了腎癌、卵巢癌、肺癌、乳腺癌、鼻咽癌、神經(jīng)母細(xì)胞瘤、嗜鉻細(xì)胞瘤、胃癌、前列腺癌等腫瘤，RASSFIA啟動子區(qū)均存在高頻率甲基化現(xiàn)象，而且在前列腺癌中甲基化程度越高，臨床預(yù)后越差。