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文檔簡介
1、目的:探討體外誘導(dǎo)的Ml型和M2型巨噬細(xì)胞對膽囊癌細(xì)胞GBC-NOZ的增殖、凋亡和VEGF-C蛋白表達(dá)的影響。
方法:用佛波酯(PMA)誘導(dǎo)人單核細(xì)胞系(THP-1)成巨噬細(xì)胞,再利用干擾素-γ(IFN-γ)、脂多糖(LPS)和白介素-4(IL-4)分別誘導(dǎo)成 Ml型巨噬細(xì)胞和M2型巨噬細(xì)胞,并分別應(yīng)用單克隆抗體CD80和CD163進(jìn)行流式細(xì)胞表型鑒定。通過體外建立transwe ll共培養(yǎng)體系將巨噬細(xì)胞、單核細(xì)胞 THP-1
2、和膽囊癌細(xì)胞GBC-NOZ共培養(yǎng),分為M1組、M2組、THP-1組、空白對照組。通過CCK-8法檢測四組GBC-NOZ細(xì)胞增殖能力并建立生長曲線,Annexin V/PI雙染凋亡法檢測四組GBC-NOZ細(xì)胞凋亡情況,蛋白質(zhì)印跡法(Western Bloting)檢測膽囊癌細(xì)胞GBC-NOZVEGF-C蛋白水平的變化。
結(jié)果:單核細(xì)胞系(THP-1)經(jīng)IFN-γ和LPS誘導(dǎo)后,轉(zhuǎn)化為表達(dá)CD80(陽性率達(dá)68.83±2.77%,
3、p<0.01)的M1型巨噬細(xì)胞,經(jīng)IL-4誘導(dǎo)后,轉(zhuǎn)化為表達(dá)CD163(陽性率達(dá)73.88±3.95%,p<0.01)的M2型巨噬細(xì)胞。M2組GBC-NOZ細(xì)胞增殖速度比M1組、THP-1組、空白對照組快,差異均有顯著性(p<0.01)。M1組GBC-NOZ細(xì)胞增殖速度比THP-1組和空白對照組慢,差異均有顯著性(p<0.01)。M1組的GBC-NOZ細(xì)胞凋亡率較M2組、THP-1組和空白對照組均顯增高(P<0.01),而M2組、THP
4、-1組與空白對照組之間細(xì)胞凋亡率無顯著性差別(P>0.01)。同空白對照組和THP-1組比較,M1組VEGF-C蛋白表達(dá)明顯減少(P<0.05);且M1組中VEGF-C蛋白表達(dá)隨著時(shí)間增加而減少。M2組的 VEGF-C蛋白表達(dá)均高于相應(yīng)時(shí)間點(diǎn)的空白對照組和THP-1組(P<0.05);M2組中VEGF-C蛋白表達(dá)隨著時(shí)間增加而增加。
結(jié)論:(1)Ml型巨噬細(xì)胞促進(jìn)GBC-NOZ細(xì)胞凋亡,抑制其生長,抑制其VEGF-C蛋白的表達(dá)
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