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文檔簡介
1、[目的]
制備攜帶人類銀屑病易感基因HLA-DRB1*0701的轉(zhuǎn)基因小鼠,并對其遺傳狀況、相關(guān)生化指標進行檢測,以期獲得具有人類銀屑病樣病理變化特征且能穩(wěn)定遺傳的轉(zhuǎn)基因小鼠模型,為銀屑病發(fā)病機理和治療藥物的研究提供有效的動物模型。
[方法]
從銀屑病患者血液標本中提取HLA-DRB1*0701基因的cDNA序列并構(gòu)建重組質(zhì)粒。通過顯微注射建立HLA-DRB1*0701轉(zhuǎn)基因FVB小鼠,采用PCR篩選陽性鼠
2、。研究轉(zhuǎn)基因小鼠的遺傳穩(wěn)定性,并利用經(jīng)典育種方法篩選純合子。通過RT-PCR方法檢測目的基因mRNA水平的表達情況。觀察轉(zhuǎn)基因鼠背部皮膚的組織學(xué)變化,檢測轉(zhuǎn)基因鼠皮膚組織中的CD4、CD8、IL-8和HLA-DR表達。
[結(jié)果]
成功構(gòu)建HLA-DRB1*0701轉(zhuǎn)基因小鼠模型,篩選出含HLA-DRB1*0701基因的純合子小鼠。通過實驗證明,HLA-DRB1*0701轉(zhuǎn)基因小鼠在皮膚組織中有目的基因mRNA水平的表
3、達,小鼠皮膚經(jīng)HE染色后可以觀察到轉(zhuǎn)基因鼠皮膚組織學(xué)特征與對照鼠相比較有明顯變化,免疫組化方法檢測轉(zhuǎn)基因鼠皮膚中CD4、CD8、IL-8和HLA-DR的分布定位基本與人類銀屑病病理學(xué)改變相似,且含量均顯著高于對照組(P<0.05)。
[結(jié)論]
成功構(gòu)建HLA-DRB1*0701轉(zhuǎn)基因小鼠,并通過實驗驗證了HLA-DRB1*0701轉(zhuǎn)基因小鼠模型與人類銀屑病病理變化的相似性,為銀屑病動物模型的制備研究提供了理論依據(jù)和實
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