纖溶酶原激活物抑制因子-1(PAI-1)調(diào)節(jié)血管平滑肌細(xì)胞表型轉(zhuǎn)化的研究.pdf

1、研究背景:血管平滑肌細(xì)胞表型轉(zhuǎn)化是血管成形術(shù)后再狹窄、動(dòng)脈粥樣硬化斑塊形成的重要病理基礎(chǔ)。纖溶酶原激活物抑制物-1(P1asminogen activator inhibitor-1，PAI-1)在調(diào)節(jié)血管平滑肌功能中發(fā)揮重要，研究顯示增高的PAI-1表達(dá)在人動(dòng)脈粥樣硬化和糖尿病病變的血管壁。PAI-1過表達(dá)可能會(huì)促進(jìn)內(nèi)膜增生，血管重塑進(jìn)程受限。本研究將通過分析PAI-1及其突變體與血管平滑肌細(xì)胞表型轉(zhuǎn)化的相互關(guān)系，探討PAI-1影響血

2、管平滑肌細(xì)胞表型轉(zhuǎn)化的分子機(jī)理。通過我們的研究闡明PAI-1在平滑肌表型轉(zhuǎn)化過程中的作用，為預(yù)防和治療血管相關(guān)疾病尋找治療靶點(diǎn)提供理論及實(shí)踐上的依據(jù)。
　　研究目的:PAI-1及其突變體在不同濃度下對(duì)血管平滑肌細(xì)胞表型轉(zhuǎn)化的研究，闡明PAI-1對(duì)血管形成的信號(hào)傳導(dǎo)調(diào)節(jié)機(jī)制，為預(yù)防和治療血管增生性病變提供理論及實(shí)踐上的依據(jù)。
　　研究方法:應(yīng)用PAI-1及其突變體處理體外培養(yǎng)的臍靜脈血管平滑肌細(xì)胞24小時(shí)，包括穩(wěn)定型突變體(P

3、AI-1-WT)，抑制PA活性受限突變體(PAI-1-R)，玻連蛋白(VN)結(jié)合能力缺失突變體(PAI-1-AK)，能顯著降低LPR1結(jié)合能力但與VN正常結(jié)合的突變體(PAI-1-E)。定量PCR技術(shù)檢測表型轉(zhuǎn)化標(biāo)志基因表達(dá)變化，通過評(píng)估PAI-1及其突變體對(duì)血管平滑肌細(xì)胞增殖表型與收縮表型的影響，并應(yīng)用明膠酶譜法(Zymography)檢測細(xì)胞培養(yǎng)上清液中MMP-2、MMP-9活性水平，探討PAI-1與平滑肌表型轉(zhuǎn)化的作用機(jī)制。

4、>　　研究結(jié)果:我們發(fā)現(xiàn)PAI-1上調(diào)血管平滑肌細(xì)胞收縮基因表達(dá)與血清反應(yīng)因子(Serum response factor，SRF)、玻連蛋白(VN)之間的結(jié)合能力增強(qiáng)相關(guān)。與之相似，采用選擇性功能缺失的PAI-1突變體，我們證明PAI-1能通過相對(duì)獨(dú)立的步驟促進(jìn)血管平滑肌細(xì)胞收縮表型基因表達(dá)，其一就是與VN和uPAR結(jié)合，另一個(gè)途徑就是與低密度脂蛋白受體蛋白-1(LPR-1)結(jié)合。進(jìn)一步發(fā)現(xiàn)，PAI-1誘導(dǎo)的血管平滑肌細(xì)胞表型轉(zhuǎn)化過程