纖溶酶原激活物抑制劑1(PAI-1)天然小分子抑制劑的篩選和分子藥理活性研究.pdf

1、纖溶酶原激活物抑制劑1(Plasminogen activator inhibitor-1，PAI-1)是纖溶系統(tǒng)的一個(gè)重要的負(fù)反饋調(diào)節(jié)因子。作為機(jī)體特異性天然的抑制劑，PAI-1能夠快速抑制尿激酶型纖溶酶原激活劑(urokinase-type plasiminogen activator, uPA)和組織型纖溶酶原激活劑(tissue-type plasiminogen activator, tPA)激活調(diào)節(jié)纖維蛋白溶解過(guò)程。PAI-

2、1水平與許多心血管和新陳代謝疾病密切相關(guān)，已有的研究表明通過(guò)抑制PAI-1活性可能成為血栓栓塞性疾病治療的新策略。尋找小分子PAI-1抑制劑近年來(lái)受到了廣泛關(guān)注，是目前相關(guān)領(lǐng)域研究的熱點(diǎn)之一。由于天然化合物在結(jié)構(gòu)多樣性、生物相容性等方面具有合成小分子無(wú)可比擬的優(yōu)越性，其在藥物發(fā)現(xiàn)研究中日益受到重視。本研究利用uPA/PAI-1催化的底物發(fā)色法藥物篩選模型從300多種天然小分子化合物中篩選到了多種對(duì)PAI-1有抑制活性的化合物，包括:丹參

3、酮2A磺酸鈉(Sodium tanshinone IIA sulfonate，STS)、隱丹參酮(Cryptotanshinone，CTS)、龍血素B(Loureirin B，LB)、毛兩面針?biāo)?Toddalolactone，TOD)、左旋紫草素(Shikonin，SHK)和竹節(jié)香附素A(Raddeanin A,RA)。在2012年，Xiao[49]等人從天然中藥丹參中篩選出丹參酮(STS)和隱丹參酮(CTS)PAI-1天然小分子抑制劑

4、。本實(shí)驗(yàn)室閆冬利用活性分離引導(dǎo)的方法從中藥血竭和兩面針中也發(fā)現(xiàn)龍血素B(Loureirin B，LB)和毛兩面針?biāo)?Toddalolactone，TOD)。本研究對(duì)另外的兩種化合物左旋紫草素(Shikonin，SHK)和竹節(jié)香附素A(RaddeaninA，RA)作用機(jī)制及體內(nèi)預(yù)防血栓和抗纖維化作用進(jìn)行分析。
　　主要結(jié)果:(1)利用uPA/PAI-1催化的底物發(fā)色反應(yīng)實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)SHK和RA能夠以劑量依賴的方式解除PAI-1對(duì)uPA活

5、性的抑制作用，IC50分別為30.68土2.32μM和27.66±4.52μM。(2) SDS/PAGE實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明SHK和RA能夠抑制PAI-1/uPA復(fù)合物的形成，但是SHK對(duì)彈性蛋白酶介導(dǎo)的PAI-1的斷裂沒(méi)有影響。(3)體外纖維蛋白溶解實(shí)驗(yàn)顯示SHK和RA能夠顯著促進(jìn)纖溶過(guò)程。(4)在FeCl3誘導(dǎo)的小鼠腹動(dòng)脈血栓模型中，SHK和RA(1 mgkg-1)通過(guò)腹腔注射給藥均能夠顯著減輕動(dòng)脈血栓的形成并延長(zhǎng)血流時(shí)間，說(shuō)明這兩種化合物

6、對(duì)血栓形成具有預(yù)防作用。(5)在CCl4誘導(dǎo)的肝纖維化模型實(shí)驗(yàn)中，SHK和RA(1 mgkg-1)通過(guò)腹腔注射持續(xù)給藥兩周后，結(jié)果顯示與對(duì)照組相比給藥組小鼠血漿中的羥脯氨酸含量明顯降低，肝纖維化程度明顯減輕。
　　結(jié)論，本研究發(fā)現(xiàn)左旋紫草素和竹節(jié)香附素A能夠顯著抑制PAI-1活性從而影響PAI-1/uPA復(fù)合物的形成，上述兩種化合物在體內(nèi)條件下能夠顯著抑制模型小鼠血栓形成并對(duì)肝纖維化有較好的治療作用。該研究發(fā)現(xiàn)了左旋紫草素和竹節(jié)香